抗精子抗体（antispermatozoa antibody，ASA）检测
时间：2010-12-18 阅读：580
男性体内的血睾屏障可使精子与免疫系统隔离。但当此种屏障因疾病或创伤而受损时，精子或其可溶性抗原逸出，可导致机体产生自身抗精子抗体（antispermatozoa antibody，ASA），从而抑制精子产生，造成男性不育。女性生殖道具有酶系统，能降解进入的精子抗原，使其不能达免疫系统。此种酶系统的缺陷可使精子抗原保持完整而刺激同种抗精于抗体产生。大约10％～30％原因不明的女性不孕症可能由于ASA所致。
测定ASA的方法很多，目前常用的有荧光抗体法，浅盘微量凝集法，伊红Y染色法，试管或玻片凝集法，固相酶染色法，免疫珠法，免疫洗选法（panning法）及ELISA法等。这些方法各有利弊，都不能*临床快速诊断的要求。庄南等（1991）在ELISA反应系统中，加入适量的PEG，可使每步反应时间在10min内完成，同时用DW-T快速冲洗代替常规的PBS-T洗涤方法，从而能在40rain内完成检验。且该法有较高特异性和精密度，适用于常规工作。现介绍快速ELISA法检测抗精子抗体。
1．试剂 ①人精子膜抗原：取20份正常生育男性的精液，液化后，用PBS洗5次，沉淀的精子混悬于含0．5％NP-40（FLUKA）的Tris-HCl缓冲液中，4℃1h，17 000Xg离心30min，取上清液测定蛋白量，即为精子膜抗原；②HRP标记的羊抗人丁球蛋白；③4％和8％PEG-PBST缓冲液：0．01mol／L，pH7．4PB加入NaCl达0．85％，Tween-20为0．05％及PEG6000为4％或8％。
2．操作步骤 将精子膜抗原用包被液按1：100稀释，包被反应板微孔，每孔100uL，4℃过夜，用含0．05％Tween-20的蒸馏水（DW-T）洗3次，每孔加待测血清50uL，同时设性、阳性和空白对照孔，43℃10rain，DW-T洗3次后，加zui适工作浓度的HBP标记的抗人γ球蛋白（用含0％小牛血清的4％PEG-PBST作1：1 000稀释），每孔100uL，43℃10min；DW—T洗3次，加底物（OPD-H202）溶液，每孔100yL，37％10min使呈色，用2mol／LH2S04 50gL终止反应，测492nm波长吸光度值（A），以P／N≥2．1为阳性。
3．临床意义 ASA的检出率因采用的检测方法不同，结果也不一致。通常不育者血清中ASA检出率在10％—30％左右。尤其是梗阻性无精症病人，ASA阳性率可高达60％。ASA的出现以及滴度升高是造成免疫性不育、不孕的根本原因，因而ASA的检测对不育的临床治疗和预后的判断提供了有价值的指标。