表皮生长因子（EGF）的测定方法
时间：2011-12-17 阅读：2099
EGF主要来源于颁下腺。成年人许多组织中也表达EGF。人成纤维细胞、唾液腺癌细胞等也可产生EGF。EGF的作用没有种属特异性，人和小鼠的EGF对人成纤维细胞的作用相同。
1．Swiss 3T3细胞增殖法
（1）用含5％FCS的DMEM培养液将Swiss 3T3细胞调整成1×104／mL，接种于60mm的培养皿中（5mL），置37C 5％C02温箱中培养4～5d，待细胞汇合后，更换上述培养液，继续培养2～3d，此时细胞数不再增多。
（2）分别加入200ral系列稀释的待测样品或标准品，阴性对照加培养液，继续培养4d。
（3）采用3H-TdR掺人法或比色法测定细胞增殖反应。根据标准曲线计算待测样品中EGF的含量（活性），或用诱导50％zui大细胞增殖的zui高稀释度表达EGF的含量。
2．BALB／c 3T3细胞增殖法
（1）用含5％FCS的DMEM培养液将Swiss 3T3细胞调整成2×104／mL，接种于60mm的培养皿中（5mI），置37C 5％C02温箱中培养5ho更换同样培养液，继续培养24h。
（2）向培养物中加入100~L系列稀释的待测样品或标准品，阴性对照培养皿加培养液，培养16h后，同上法测定和计算EGF的含量（活性）。