亲和层析蛋白纯化系统层析法

亲和层析蛋白纯化系统使用前才添加成10 mM β-mercaptoethanol.

Buffer B-300/20: Buffer B-300/0 加有20 mM imidazole

Buffer B-300/250: Buffer B-300/0 加有250 mM imidazole

 

亲和层析蛋白纯化系统方法步骤：

1、亲和层析胶体1mL已经装填在管柱内，成为一淡蓝色胶柱。请把管柱架直在铁架上，去除下方的填塞物，用bufferB-300/0流洗20mL后塞住出口，准备注入样本。  

2、除去胶面上方的缓冲液，并取出样本(IEX)使其回到室温，慢慢用滴管加到亲和胶体上，小心勿弄乱胶体表面；让样本没入胶体中，同时收集流出液每管2.5mL。

3、待样本全部进入胶体后，关闭出口，再慢慢加入bufferB-300/20,打开出口收集流出液；bufferB-300/20共流洗30mL。

4、接着以bufferB-300/250流洗30mL,方法同上，收集。

5、所有收集均定量蛋白质并测定酶活性，取收集酶活性zui高的数个，共得多少mL(AF)，保留100μL以供分析。