水质微生物检验生活用水粪链球菌检测板1  原理及适用范围

粪链球菌普遍存在于水环境中，为条件致病菌，它来源于人和温血动物的粪便，可以在水中存活很长时间，引起人类疾病。是水体受到粪便污染的重要指标菌，更能客观的反映水质卫生状况。中华人民共和国城镇建设标准在对城市供水、饮用水水质监测中增加了水中粪链球菌的检测指标。粪链球菌检测板是一种预先制备好的一次性培养基产品，含有标准的营养培养基，冷水可溶性的吸水凝胶和脱氢酶指示剂氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在检测板上呈红色带黄晕斑点。本产品适合于生活饮用水、生产加工用水及食品中粪链球菌的测定。执行标准：国家标准《饮用天然矿泉水检验方法》（GB/T 8538）；《中华人民共和国城镇建设行业标准》（CJ/T 141～150）；《中华人民共和国出入境检验检疫行业标准》（SN/T 1933.1）。  

2  操作方法

2.1 水样品检测

2.1.1 水样过滤：将灭菌的过滤装置连接到抽滤瓶上，用灭菌镊子夹取直径47 mm～50 mm，孔径为0.45μm的灭菌滤膜，放在滤器底部，旋紧盖子，将250 mL水样注入滤器中抽滤。

2.1.2 揭开水质微生物检验生活用水粪链球菌检测板检测板上层膜，在检测板纸片上加1 mL无菌水湿润后，迅速用无菌镊子将过滤水样的滤膜移放在检测板纸片上（滤膜截留细菌面向上），滤膜与纸片之间不要夹留着气泡，贴好上层膜。

2.2 食品样品检测

2.2.1 取25 g（或25 mL）样品放入装有225 mL生理盐水的均质袋中，以8000 r/min均质1～2 min，制成1:10样品均液，根据样品污染程度及检验需要，可进一步制成10倍递增的样品稀释液。

2.2.2 将粪链球菌检测板上层膜不干胶标签部分揭开，用无菌吸管吸取1 mL样品稀释液均匀滴加到纸片上，迅速贴好上层膜并水平晃动检测板，静置10 s左右，待样品稀释液*被吸附在滤纸上。每个稀释度接种两个检测板作为重复。

2.3 培养：将水质微生物检验生活用水粪链球菌检测板检测板叠在一起，倒置于恒温培养箱内，36℃±1℃，培养15～24 h。

3  结果判读

在检测板（滤膜）上生长的红色带黄晕的斑点即为粪链球菌阳性，若纸片上的红色斑点无黄晕则为粪链球菌阴性。

4  计数原则及报告方式

4.1  滤膜过滤水样：以滤过一张无菌滤膜后产生的菌落数计算，选择菌落数在20～100CFU的检测板进行计数后即为250 mL水样品中所含的菌落总数。结果以CFU/250 mL为单位报告。

4.2 食品样品计数

4.2.1 以生长有30～300CFU的检测板为计数适宜范围。

4.2.2 若只有一个稀释度检测板上的菌落数在计数合适范围30～300CFU之间，则计算两个检测板菌落数的平均值，再乘以相应的稀释倍数，作为每克（毫升）中菌落总数结果。

4.2.3 若有两个连续稀释度在适宜计数范围内时，按式（1）计算：

                        ∑C

               N= ————————     •••••••••••••••••••（1）

                   （n1+0.1n2）d

   式中：

   N——样品中粪链球菌菌落数；

   ∑C——两个连续稀释度检测板（含适宜范围菌落数的检测板）粪链球菌菌落之和；

   n1——适宜范围菌落数的*个稀释度（低）检测板个数

   n2——适宜范围菌落数的第二个稀释度（高）检测板个数

   d——*稀释度的稀释倍数

 示例：

4.2.4 若所有稀释度检测板上均无菌落生长，则以小于1/d（d—最低稀释倍数）计算。

4.2.5 低数值的估算：如果实验样品原液（水及液体饮料）或初始稀释悬液（其他样品）的两个检测板上的菌落数均小于30CFU，计算两个检测板上的菌落数的平均数。计算式（2）：

                    ∑C

                  NE = ——    •••••••••••••••••••（2）

                        nd

式中：

NE——每毫升或每克样品中菌数的估算值；

∑C——两个检测板上菌落数的和；

n——检测板的数量；

d——样品初始悬液或实际接种悬液的稀释倍数。

4.2.6 大数值的估算：若所有稀释度的检测板上菌落数均大于300CFU，计数较接近300CFU的检测板上的菌落并计算出平均数，其他检测板可记录为多不可计。结果计算式（3）：

                        ∑C

                  NE = ——   •••••••••••••••••••（3）

                        nd

式中：

NE——每毫升或每克样品中菌数的估算值；

∑C——两个检测板上菌落数之和；

n——检测板的数量；

d——与样品悬液相*的稀释倍数。

5  结果报告

固体样品以CFU/g为单位报告，液体样品以CFU/mL为单位报告。

6  附加说明

    注意使用过的检测板上带有活菌，需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理。