PuroSpher STAR 色谱柱的使用步骤分为以下四步
时间:2022-08-22 阅读:963
PuroSpher STAR 色谱柱的技术主要包括填料技术和装柱技术,填料的好坏对色谱柱分离性能和选择性有决定性影响。装柱技术没有想象中那么简单,不同固定相、不同粒径、不同柱管内径和长度,装柱工艺都有所不同,要装出紧密、稳定、均一的柱床,需要经验积累。
一般情况下,正相反相柱应该都能反冲,只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲,不过目前这样的柱子已经比较少见了。反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉,反冲后还是正着用比较好,以免柱子的两头都被污染。建议正向使用,反向冲洗。
PuroSpher STAR 色谱柱的使用步骤分为以下四步:
步骤一:预处理PuroSpher STAR 色谱柱.
在萃取样品之前,为了湿润PuroSpher STAR 色谱柱填料,用一满管溶剂冲洗管子。反相类型硅胶和非极性吸附剂介质,通常用水溶性有机溶
剂如甲醇预处理,然后用水或缓冲溶液。甲醇湿润吸附剂表面和渗透键合烷基相,以允许水更有效地湿润硅胶表面。有时前预处理溶剂
使用在甲醇之前。这些溶剂通常是与洗脱溶剂一样,是用之消除固相萃取管上的杂质及其对分析物的干扰,也可能该杂质只溶于强洗脱溶剂。
正相类型固相萃取硅胶和极性吸附剂介质,通常用样品所在的有机溶剂来预处理。离子交换填料将用于非极性有机溶剂中的样品,其用3-5ml的去离子水或低浓度的离子缓冲溶液来预处理。为了使固相萃取填料从预处理到样品加入时都保持湿润,允许大约1毫升的预处理溶剂在管过滤片(frit)或萃取片表面之上。如果样品是从一个贮液管或过滤管引入固相萃取管,则多加入0.5毫升后的预处理溶剂到1毫升的固相萃取管中,如果是2毫升到3毫升的PuroSpher STAR 色谱柱中,多加入4升到6毫升管中等等。这是为了保证在样品加入之前PuroSpher STAR 色谱柱湿润。如果在样品加入之前,PuroSpher STAR 色谱柱中的填料干了,重复预处理过程。在重新引入有机溶剂之前,用水冲洗柱中缓冲溶液的盐。
步骤二:加入样品.
将样品装入PuroSpher STAR 色谱柱,此时,固相萃取小柱中的填料会吸附样品中所感兴趣的化合物或者样品中的杂质。这样,当样品流出时,所选择的化合物(包括杂质)被留在PuroSpher STAR 色谱柱上。
步骤三:冲洗填料.
用一种强得能洗脱杂质而又弱得能保留感兴趣的化合物的冲洗液来冲洗杂质。
步骤四:洗脱感兴趣的化合物。
用溶剂将被吸附在PuroSpher STAR 色谱柱上的化合物洗脱在溶液里。