碱性蛋白酶（AKP）活性检测试剂盒说明书
微量法
货号：BC2305
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂一：临用前加入4mL蒸馏水，充分溶解；2-8℃保存8周。

2. 试剂二：临用前取1瓶加入4mL提取液，沸水浴中搅拌溶解；2-8℃保存8周。

3. 标准品：20μmol/mL标准酪/酸。

产品说明：
AKP是指在碱性条件下催化蛋白质肽键水解的酶类，属于丝*酸蛋白酶。此外，该酶还能够水解酯键、酰胺键，具有转酯及转肽的功能。该酶是主要工业用酶之一，广泛应用于制药、丝绸、食品、制革等行业。
在碱性条件下，AKP水解酪蛋白生成酪/酸；在碱性条件下，酪/酸还原磷钼酸生成钨蓝；钨蓝在680nm有特征吸收峰，测定680nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
研钵/匀浆器、台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1.5 mL EP管和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称约0.1g组织，加入1mL提取液，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心10min，取上清，即粗酶液，置冰上待测。或直接称取0.1g酶制品，加入1mL提取液，置冰上待测。
二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。

2. 试剂一、试剂二和试剂三置于40℃水浴保温30min以上。

3. 标准溶液的配制：临用前将20μmol/mL标准液用蒸馏水稀释80倍至0.25μmol/mL 标准溶液使用，现用现配。

1. 样本测定：(1.5mLEP管中分别加入下列试剂)

取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，于680nm测定光吸收，分别记为A对照管、A测定管、A空白管、A标准管。
并计算ΔA测定=A测定管-A对照管、ΔA标准=A标准管-A空白管。空白管和标准管只需做1-2次

注意事项：
若反应较弱，（A测定管-A对照管）差值较小，可适当延长反应时间（20-30min），即第一步水浴时间，最后计算酶活时对公式进行修改。
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