Easy-Lowry蛋白定量试剂盒说明书
时间：2020-09-23 阅读：2535
Easy-Lowry蛋白定量试剂盒说明书
Easy-Lowry Protein Assay Kit
Easy-Lowry蛋白定量试剂盒
目录号：K2341
保存：BSA 标准品：2-8℃
其 它 组 分：室 温
组分说明
Cat. No. K2341
Kit Size 1000 次/微孔，50 次/试管
试剂 A 50 ml
试剂 B 25 ml
BSA 标准品 （2 mg/ml） 2 ml
产品简介
Easy-Lowry 蛋白定量试剂盒是一种操作简便快捷的 Lowry 法蛋白定量试剂盒，可用于多种不同缓冲系统以及各种不同蛋白质的定量检测。Easy-Lowry 蛋白定量试剂盒是在 Improved-Lowry 蛋白定量试剂盒基础上进行优化改良的产品，其保留了Improved-Lowry 抵抗干扰能力较强的优点，并进一步简化了操作步骤，减少了检测时间，并且能得到与mproved-Lowry 蛋白定量接近的定量结果，其检测范围为 0-2000 μg/ml。
注意事项
1. 本产品可以采用分光光度计（试管检测法）或者酶标仪（微孔检测法）测定蛋白浓度。
2. 建议每次测定蛋白样品时，绘制标准曲线，以获得准确数据。
3. BSA 标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致（可用 1×PBS 或 0.9%生理盐水稀释）。
4. 如待测样品中含较多的干扰物质（具体见附表 1），可采用 Bradford 法蛋白定量试剂盒（K0013）或其他蛋白定量产品。
操作步骤
1. 稀释 BSA 标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释 BSA 标准品。
管号 稀释液用量（μl）BSA标准品用量（μl） BSA标准品终浓度（μg/μl）
A 0 200 2
B 200 200 1
C 200 200（从B管中取） 0.5
D 200 200（从C管中取） 0.25
E 200 200（从D管中取） 0.125
F 200 0 0（空白）
2. 稀释试剂 B：将试剂 B 用去离子水稀释 8 倍混匀待用。
3. 定量检测：
3a. 试管检测法（蛋白浓度检测范围：0-2 μg/μl）
1）按上表，将稀释好的 A-F BSA 标准品和待测蛋白样品（原液或稀释液）各 200 μl 分别加到作好标记的试管中。
2）向各试管中加 1 ml 试剂 A 迅速振荡混匀，室温准确放置 10 分钟。
3）向各试管中加入 4 ml 稀释过的试剂 B，迅速在涡旋仪上混匀，室温静置 30 分钟。
4）用分光光度计测定 750 nm 下的吸光度值。
5）绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
3b. 微孔检测法（蛋白浓度检测范围：0-2 μg/μl）
1）按上表，将稀释好的 A-F BSA 标准品和待测蛋白样品（原液或稀释液）各 5 μl 分别加到作好标记的 96 孔板微孔中。
2）向各微孔中加 50 μl 试剂 A，迅速用酶标仪振荡混匀，室温准确放置 10 分钟。
3）向每孔中加入 200 μl 稀释过的试剂 B，迅速用酶标仪振荡混匀，室温静置 30 分钟。
4）用酶标仪测定 750 nm 下的吸光值。
5）绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
注意：
1）建议以去除背景值后的吸光值读数绘制标准曲线。
2）由于操作误差导致标准品读数严重偏离线性曲线的应舍去。
3）未知样品浓度可以从标准曲线方程中计算得出, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。
4）如果得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。
附表 1.干扰物附表
化合物 耐受浓度 化合物 耐受浓度
缓冲液 去垢剂及变性剂
磷酸钾 0.03 M 去氧胆酸钠 0.0625%
甘氨酸 0.25 mM CHAPS 1 mM
HEPES 2.5 μM 辛葡糖 干扰
MES 25 μM SDS 1.25%
MOPS 25 μM Triton X-100 0.25%
Na +-柠檬酸 2.5 μM 糖类
PIPES 5 μM 葡萄糖 30 mM
磷酸钠 0.25 μM 蔗糖 10 μM
螯合剂
TES 1 mM
Tris 250 μM EDTA 125 μM
盐类 EGTA 干扰
还原剂
硫酸铵 28 μM
NaCl 30 μM β-巯基乙醇 1.75mM
尿素 200 μM DTT 50 μM
其他
极性化合物
丙酮 1.25% 丙烯酰胺 1.25 mg/ml
DMSO 6.20% DNA 190 μg/ml
乙醇 12.50% 脂类 25mM
1,2-亚乙基二醇 0.25% 两性电解质 干扰
甘油 25% 中性 TCA 12.5 mg/ml
实验代做服务：
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