碱性磷酸酶（AKP/ALP）活性检测试剂盒说明书

注意：正式测定之前选择预期差异大的样本做预测定。

规格：100T/48S 产品内容：

提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃避光保存，变成蓝绿色不能使用。

标准品：液体 1mL×1 支，2μmol/mL 酚标准液，4℃保存。

产品说明：

AKP/ALP 是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。

AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。

在碱性环境中，AKP/ALP 催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与 4-氨基安替比林和铁氰HUA钾反应红色亚醌衍生物，在 510nm 有特征光吸收；通过测定 510 nm 吸光度增加速率，来计算 AKP 活性。试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

称取约 0.1g 组织，加提取液 1mL 充分研磨，4℃、10000rpm 离心 10min，取上清液待测。血液可直接用于测定，或者适当稀释后用于测定。

二、测定步骤：

1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 510 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二置于 37℃水浴中预热 30 min 以上。

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本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！

三、AKP/ALP 活性计算：

1. 按蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生 1 μmol 酚为一个酶活力单位。

AKP/ALP (U/mg prot)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样]÷(Cpr×V 样)÷T

=0.133×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷Cpr

2. 按样本鲜重计算

活性单位定义：37℃中每克组织每分钟催化产生 1 μmol 酚为一个酶活力单位。

AKP/ALP (U/g 鲜重)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样] ÷(W÷V 提取×V 样)÷T=0.133×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W

3. 按液体体积计算

活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生 1μmol 酚为一个酶活力单位。

AKP/ALP (U/mL)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样] ÷V 样÷T

=0.133×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)

C 标准品：2μmol/mL；V 反总：反应体系总体积（mL），204μL=0.204mL； V 样：加入反应体系中上清液体积（mL），0.004mL；T：反应时间（min），15 min；V 提取：加入提取液体积，1mL； W：样本鲜重，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。

注意事项：

1、 试剂一、试剂二和试剂三均需避光保存。

2、 试剂三变蓝绿色后不能再使用。

3、 加入试剂三后必须立即混匀，否则显色不*。

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