2×GoldStar Best MasterMix（无染料）说明书

货号：K0656

保存条件：-20℃长期保存，如需频繁使用，可存放于2-8℃，尽量避免反复冻融。

组分说明

               Cat. No.                         K0656      K0656B

               Kit Size                         1 ml       5×1 ml

               2×GoldStar Best MasterMix        1 ml       5×1 ml

               RNase-Free Water                 1 ml         5 ml

           注意：2×GoldStar Best MasterMix含有GoldStar  Best DNAPolymerase,

                2×GoldStar Best PCR  Buffer, 3 mM MgCl2和400 µM  dNTPs。

产品简介

　　本品为由GoldStar Best  DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为 2×，具有操作简便快速、灵敏度高、特异性2+强、稳定性好的优点，可最大限度地减少人为误差和污染。该产品所含的      GoldStarBest DNA Polymerase是经过特殊处理的热启动高保真聚合酶。该聚合酶具有5′-3′DNA聚合酶活性，5′-3′核酸外切酶活性和  3′-5′核酸外切酶活性，在普通PCR条件下，与GoldStar Taq DNA Polymerase相比，具有扩增效率高、错配率低的优良性能。化学修饰使该酶在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在 95℃下孵育10分钟，该条件可以整合入已有的PCR热循环程序。优化的缓冲体系使酶的作用发挥最大功效，实现对目的片段的高保真、高特异性、高扩增效率、高灵敏度扩增。本品不含染料，PCR程序结束后可根据需要加入适量上样缓冲液后进行电泳操作。扩增得到的 PCR产物3′端附有一个“A”碱基，因此可直接用于 T/A克隆。适用于常规的 PCR反应和对高保真性有要求的基因克隆等实验。

质量控制

　　经检验无外源核酸酶活性； PCR方法检测无宿主残余DNA；能有效地扩增多种基

因组中的单拷贝基因；2-8℃存放三个月，活性无明显改变。

                本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途

    使用方法

    以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的

    片段大小不同进行相应的改进和优化。

    1. PCR反应体系

              试剂                             50 μl反应体系           终浓度

              2×GoldStar Best MasterMix          25 μl             1×

              Forward Primer，10 µM                2 μl           0.4 μM

              Reverse Primer，10 µM                2 μl           0.4 μM

              Template DNA                       <1 μg        <1 μg/reaction

              RNase-Free Water                 up to 50 μl

       注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

    2. PCR反应条件

步骤                 温度              时间

预变性                95℃            10 min

变性                 94℃             30 s

退火               55-65℃            30 s     30-40个循环

延伸                 72℃             60 s

终延伸               72℃             5 min

       注意：1）一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。

       2）延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品中所包含的GoldStar Best DNA Polymerase的扩增效率为1 kb/min。

       3）可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

       4）本产品须在预变性95℃，10 min条件下实现酶的活化。

    3.结果检测：本产品不含染料，反应结束后，取5 µl反应产物加入适量上样缓冲液后进行琼脂糖凝胶电泳检测。

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