外泌体是包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡，是细胞间信号传输的载体。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体，它们广泛存在于血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁等体液中，参与细胞间通讯。近年来，外泌体的研究热度持续攀升，在2019年国家自然科学基金获批项目中，外泌体研究相关项目的总数突破500个，立项的总金额突破2亿元。由于外泌体的尺寸很小仅为30~200 nm，目前很少有技术能够在单个外泌体水平同时提供物理表征和蛋白表型分析。单个外泌体表征分析是将免疫学与光学完·美结合的种新技术。该技术用免疫识别将定的外泌体进行捕获分离，然后再对目标外泌体的表面标志物及内容物（如携带的蛋白质、RNA、DNA及细胞因子）进行定量分析，从而更加全面地反映外泌体的性。

    作为外泌体表征分析的倡·导者，美国NanoView Biosciences于2018年推出了全自动外泌体荧光检测分析系统ExoView，该系统经推出，便引起了外泌体域科研工作者的广泛关注，仅两年在已有100多个实验室采用该技术，发表文献近百篇，刊载在Cell, Cell Biology, Journal of Extracellular Vesicles等期刊。基于中国外泌体研究的快速发展，Quantum Design中国在北京建立了业的客户服务中心，正式推出ExoView®外泌体全面表征试剂盒测试服务，只需要少量样品即可次完成外泌体计数、粒径、蛋白表达、蛋白共定位、亚群分布的分析。

    ExoView®外泌体全面表征试剂盒可对细胞培养上清、血浆、血清、尿液、脑脊液、唾液等生物样本中的外泌体直接进行分析，仅需50 µl稀释样本。试剂盒的捕获抗体为anti-CD81, anti-CD9, anti-CD63, 同型 IgG 对照，也可自定义。此外，试剂盒的荧光抗体分为CD9（Blue）、CD81（Green）、 CD63（Red）。

ExoView®外泌体全面表征试剂盒的势包括：

• 异性捕获：芯片上可包被多达6 种捕获抗体，异性捕获含定蛋白标记物的外泌体。

• 对阳性外泌体计数：芯片捕获外泌体后，可通过单粒子干涉反射成像传感器（SP-IRIS）技术直接检测样品中外泌体的数量。

• 单个外泌体蛋白共定位分析：检测每个外泌体的荧光信号并进行统计，可获得荧光共定位信息，用于分析样品中不同表型外泌体的比例。

• 无需纯化：使用抗体捕获模式，防止样品中杂质影响结果，可直接检测血液、尿液和细胞培养液中的外泌体，未纯化样品的测量结果与纯化后基本致。

• 粒径分辨率高：高精度SP-IRIS技术，可检测≥50 nm的外泌体，测量结果与电子显微镜检测结果基本致，并统计生成外泌体的粒径分布结果。

• 可检测外泌体内容物：试剂盒配套相应的穿膜剂，可穿透外泌体并对外泌体内容物进行染色并检测，如下图所示，Non-permeabilized时只能检测到跨膜蛋白CD9的荧光信号， Permeabilized后即可检测到外泌体内容物（如PD-L1、P-tau等）的表达。

检测流程：

试剂盒检测结果示例：

• 不同外泌体亚群数量统计

• 外泌体粒径检测

• 荧光共定位分析

• 单个外泌体成像图

部分文献：

[1]. Characterization of extracellular vesicles and synthetic nanoparticles with four orthogonal single‐particle analysis platforms. Journal of Extracellular Vesicles. 2021

[2]. WJMSC‐derived small extracellular vesicle enhance T cell suppression through PD‐L1. Journal of Extracellular Vesicles. 2021

[3]. Isolation and characterization of extracellular vesicle subpopulations from tissues. Nature protocols. 2021

[4]. Targeting tumor-derived exosomes using a lectin affinity hemofiltration device. Cancer Research. 2021

[5]. Small RNA Sequencing across Diverse Biofluids Identifies Optimal Methods for exRNA Isolation. Cell. 2019

部分应用单位：

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