ELISA(酶联免疫吸附法)是一种快速检测临床和实验样品中蛋白质含量的方法，根据研究需求，有许多方式可供选择，如直接ELISA，间接ELISA，竞争性ELISA和夹心ELISA等。ELISA是生物学实验常用的一种技术，其具有快速、易于操作等优点，但当条件不合适时，其往往不能给出*的结果，不能保持一致性和可复制性。此时，我们需要快速调整相应的实验步骤，如下为一些常见的问题和解决技巧。

一、信号强度低

如果你得到多个读数低于吸光度的下限(<000)，且目标分析物的浓度不在标准曲线的范围内，那么可能你的分析物浓度太低了，或者，可能没有达到检测的*条件。

解决方案：

a.增加抗体的孵育时间。如果协议指示抗体在室温孵育2小时，而得到的结果不好，尝试在4°C孵育过夜。这额外的时间将允许zui大的抗体结合，应该会导致信号的增加。

b.增加二抗--酶共轭物的浓度。ELISA中的E代表酶(通常是辣根过氧化物酶/HRP)，它与基质(通常是TMB)发生反应，产生一种充满活力的蓝色。将HRP浓度增加50%，或加倍，会产生更强的颜色。

c.TMB底物避光保存，使其性能zui大化。保持ELISA板在黑暗中，因为TMB对光非常敏感。

二、高背景

ELISA板上的空白孔起阴性对照的作用，任何明显高于0的值都表示有背景问题。或者，你可能正在检测其他而不是你的待测物。

解决方案：

是否按照协议*清洗? 清洗板孔所需的体积是很重要的。由于毛细管作用，孔表面的溶液稍微升高，所以清洗缓冲液需要到达孔的顶部才能*清洗。但是要小心，因为清洗太多会削弱信号。

三、意想不到的ELISA数据

你期望一个样本值比另一个样本值高，相反得到的值遍布整个区域，浓度与你所期望的相差甚远。

解决方案：

a.标准曲线是否正确？协议是否规定了线性，4或5参数曲线? 检测你所使用的拟合方式。

b.标准品是否有合理的数值?如果标准品没有呈线性减少或增加，那么应该放弃样本浓度的计算，错误的标曲无法得到准确的样本值。

四、干扰

干扰物质如洗涤剂或NADH(在血清中存在)会影响你的吸光度阅读，并使你的结果不准确。

解决方案：

a.仔细阅读协议。对干扰物质敏感的协议通常会告诉你它们是什么，以及如何避免它们。

例如，如果使用血清实验，血红蛋白会干扰，建议不要使用溶血的血清样本(溶解的红细胞中有红色)

b.你可能别无选择，只能使用含有干扰物质的样品。如果你的目的抗原浓度很高，用一个

很低但仍然很容易被检测到的稀释样品，这样可以稀释干扰物质。