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人咽鳞癌细胞 FaDu细胞实验操作步骤

时间:2024-10-05      阅读:368

       在成功获取并培养了人咽鳞癌细胞FaDu细胞后,接下来进入实验操作的核心阶段。首先,我们需要对细胞进行传代处理,以确保实验所需细胞量的充足及细胞活力的维持。具体操作如下:


1. **准备培养基与试剂**:确保新鲜的培养基(如RPMI-1640培养基)已预热至37℃,并含有10%胎牛血清及必要的抗生素(如青霉素和链霉素),以防污染。同时,准备胰蛋白酶-EDTA溶液用于细胞消化。


2. **细胞消化**:在显微镜下观察FaDu细胞生长情况,当细胞密度达到约80%-90%时,吸去旧培养基,用无菌PBS轻轻洗涤细胞两次,以去除残留的培养基和死细胞。随后,加入适量预温的胰蛋白酶-EDTA溶液,覆盖细胞表面,放入37℃、5% CO₂培养箱中孵育约3-5分钟,直至细胞间隙增大,形态变圆。


3. **细胞收集与重悬**:轻轻拍打培养皿底部,使细胞脱落,加入等体积的新鲜培养基终止胰酶作用,用移液枪轻轻吹打细胞悬液,确保细胞充分分散成单个。


4. **细胞计数与接种**:取少量细胞悬液进行计数,根据实验需求调整细胞密度后,将适量的细胞悬液接种到新的培养皿或培养板中,轻轻摇晃使细胞均匀分布,然后放回培养箱中继续培养。


5. **后续处理**:根据实验目的,FaDu细胞可用于多种实验,如药物敏感性测试、基因编辑、信号通路研究等。在接下来的步骤中,可能需要对细胞进行转染、加药处理或收集细胞进行分子生物学分析。每一步操作都需严格遵循无菌原则,确保实验结果的准确性和可靠性。


通过以上步骤,我们成功完成了FaDu细胞的传代与基本处理,为后续深入研究奠定了坚实的基础。


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