二氧化碳培养箱中的微生物往往会对培养的结果产生一定的影响，常见的微生物处理方式包括物理过滤和灭菌，下面让我们一起来探讨两种方式。

1.1 物理过滤  将箱体内气体通过过滤器循环，使箱体内气体洁净度达到一定的级别(常见UPLA过滤器为1级、HEPA 过滤器为 100 级)；主要作用是保持箱体内洁净度，保证培养箱体内的环境，但对微生物及病毒不起到任何的杀灭作用，仅仅是将箱体内的微生物过滤到过滤器内，这样需要对过滤器进行定期更换，采用物理过滤的培养箱更适合于环境条件较好的实验室。

1.2 灭菌  杀灭或清除传播媒介上的所有微生物(包括芽胞)，使之达到无菌程度。经过灭菌的物品称“无菌物品”，培养箱内的无菌处理是指杀灭所谓微生物、病毒等，*避免环境对样本的影响，以及消除不同样本之间的交叉污染。根据不同的去除对象以及应用环境需求，采用有效的方法。

1.2.1 微生物分类

根据微生物的抵抗能力不同，可将微生物分为如下几类：

① 细菌繁殖体  易被一般的消毒剂杀灭，一般革蓝氏阳性细菌对消毒剂较敏感，采用化学消毒效果较为明显； 革蓝氏阴性杆菌则常有较强的抵抗力，一般的化学消毒效果不明显，但对热敏感，采用热力学方法效果明显。

② 细菌芽孢和真菌芽胞  有厚厚的孢子壁，对化学消毒剂有较强的抵抗力，一般的化学消毒对芽孢效力有限；消毒能力强的化学试剂对芽孢有一定的杀灭作用，但对浓度、处理方法等要求严格；常见的方法是采用热力学方法。

③ 病毒  种类较多，不同病毒种类对外界的抵抗能力不同，化学试剂消毒的效果也不相同，RNA活性受温度影响明显，一般采用热力学方法去除。

④ 真菌  普遍对环境抵抗能力强，一般的紫外消毒方式和化学试剂消毒达不到预期的效果，通常采用热力学方法处理，煮沸或使用高压灭菌灯。

1.2.2 热力学灭菌方法

培养箱内常见的热力学灭菌方法包括干热灭菌和湿热灭菌。

①干热灭菌 将箱体内加热到120℃以上，湿度为20% 以内，持续一定的时间，通过高温使蛋白质及核酸变性失活，达到杀灭的目的。有些真菌芽孢，由于厚厚的细胞壁保护，能够抵抗一定的高温，灭菌不能*。

②湿热灭菌 在高温的同时保持箱体内饱和湿度，达到*灭菌效果。
 

湿热灭菌相比于干热灭菌，主要优点是：

①湿热灭菌中的菌体吸收水分，蛋白质含水量增高，所需凝固温度降低，易凝固变性；

②高温水蒸汽对蛋白质有*的穿透力，从而加速蛋白质变性而迅速死亡；

③蒸汽有潜热存在，能迅速提高菌体的温度，从而增加灭菌效力。

由此可见，培养箱采用湿热灭菌是一种可行且效果的灭菌方法，能*消灭细菌、真菌、孢子、病毒等微生物且没有二次污染。一个季度采用一次高温灭菌，消除潜在的污染风险。

PART 2/二氧化碳培养箱维护

居安思危，防患于未然，是智者避免灾祸的良方，是降低损失的措施。二氧化碳培养箱的日常维护就是良方，做好以下几个方面可以大大降低污染的概率:

2.1  重视管理  安全为目的，实验室内的工作人员应明白自身的态度和人为因素对实验环境的重要性。定期对系统进行校正，至少每年一次。各项数值一旦固定后，不要随意调节，以免影响箱内温度、湿度、CO2浓度的波动，降低机器的灵敏度，同时还会影响培养箱内的细胞生产状态。

2.2  规范操作  必须穿着实验服，换上拖鞋或者穿一次性的鞋套。实验操作时必须配带一次性手套，特别是打开培养箱前，必须先用75%的酒精喷洗双手，再取出培养箱中的细胞培养瓶或培养板。显微镜下查看细胞培养瓶或培养板后，再放回培养箱时，同样也要先喷酒精消毒。培养箱的两个门开关取（放）物要迅速，否则会影响CO₂的浓度、温度和湿度，造成污染。切记开门时不要对着培养箱说活，大口呼吸甚至是打喷嚏。

2.3  清洁  去除灰尘、污垢和有机污渍。粉尘、污物以及有机物是微生物的栖身之所，并可能影响除污染剂（抗菌剂、化学杀菌剂以及消毒剂）的作用，必须先经过清洁才能实现消毒和灭菌的目的。

2.4  消毒抑菌  医用酒精可以很好地起到消毒作用，日常可使用75%的酒精对培养箱主体和内部进行擦拭，一个月一次即可。培养箱内部可以放置2%~10%的硫酸铜溶液，硫酸铜溶液具有一定的杀菌抑菌效果。