紫外分光光度法测定蛋白质含量方法
时间：2019-05-04 阅读：4634
1. 实验部分
1.1 仪器与试剂：
Labtech UV POWER紫外分光光度计；玻璃比色皿一套；考马斯亮蓝G250；
牛血清蛋白；*纯水。
1.2 试液的制备：
牛血清蛋白标准溶液（1000ug/ml）的制备 称取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中，加入*纯水溶解并定容。
考马斯亮兰G250试剂 称取100mg考马斯亮兰G250，溶于50ml95％的乙醇后，加入120ml85％的磷酸，用水稀释至1升。
2. 结果与讨论
2.1 校正曲线的绘制
准确吸取1000ug/ml牛血清蛋白标准溶液0.0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml分别加入到6只10ml试管中，然后用*纯水补充到0.1ml，各试管分别加入5ml考马斯亮兰G250试剂，混合均匀后，即可依次在595nm处测定吸光度。以浓度
为横坐标，吸光度为纵坐标绘制校正曲线如下图，校正曲线方程为A=0.613556C+0.001008，R=0.9994。
2.2 精密度
配制0.6mg/ml牛血清蛋白的考马斯亮兰溶液连续进样6次，得到吸光度的相对标准偏差。
表1 精密度测定结果
次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD% |
A | 0.2626 | 0.2622 | 0.2620 | 0.2628 | 0.2629 | 0.2626 | 0.13 |
2.3 稳定性
取1mg/ml牛血清蛋白标准溶液每十分钟测定一次，50分钟内的吸光度变化如下表2。
表2 稳定度测定结果
时间（min） | A1 | A2 | A3 | A平均 |
0 | 0.5511 | 0.5523 | 0.5516 | 0.5517 |
10 | 0.5204 | 0.5184 | 0.5168 | 0.5185 |
20 | 0.4910 | 0.4901 | 0.4903 | 0.4905 |
30 | 0.4765 | 0.4716 | 0.4721 | 0.4734 |
40 | 0.4524 | 0.4475 | 0.4440 | 0.4480 |
50 | 0.3982 | 0.3935 | 0.4031 | 0.3983 |
3. 结论
该方法测定快速、简便，干扰物少，是目前灵敏度较高的蛋白质含量测定的紫外分光光度法