电泳仪常见问题处理方法
时间：2023-08-09 阅读：872
注意事项
1、电泳中使用的溴化乙锭（EB）为中度毒性、强致癌性物质，务必小心，勿沾染于衣物、
皮肤、眼睛、口鼻等。所有操作均只能在专门电泳区域操作，戴一次性手套，并及时更换。
2、预先加入EB 时可能使 DNA 的运动速度下降15%左右，且不同构型的 DNA 的影响程度不同。所以为取得较真实的电泳结果可以在电泳结束后再用 0.5μg/ml 的 EB 溶液浸泡染色。EB在光照下易降解，若凝胶放置一段时间后才观察，即使原来胶内或样品已加 EB，建议选择EB溶液浸泡染色。
3、加样进胶时不要形成气泡，需在凝胶液未凝固之前及时**，否则，需重新制胶。
4、电泳时溴酚兰在琼脂糖凝胶中的运动速度可以用于参考电泳速度，已实际电泳条带运动速度为准。
常见问题分析
常见问题 | 原因 | 对策 |
DNA条带模糊 | DNA降解 | 实验过程避免核酸酶污染 |
电泳缓冲液陈旧 | 电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，PH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。TBE建议使用10次就更换缓冲液 | |
所用电泳条件不合适 | 电泳时电压不应超过6V/CM，温度＜30℃，巨大DNA链电泳，温度应＜15℃，核查所用电泳缓冲液的缓冲能力，注意经常更换 | |
DNA上样量过多 | 减少凝胶中DNA上样量 | |
DNA含盐过高 | 电泳前通过乙醇沉淀去除多余盐分 | |
有蛋白污染 | 电泳前酚抽提去除蛋白 | |
DNA变性 | 电泳前勿加热，用TE缓冲液稀释DNA | |
出现片状拖带或涂抹带 | PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往PCR体系需要优化，PCR程序需要摸索。 | 其对策有：调整PCR体系和PCR程序，摸索出合适的条件。 |
不规则DNA带迁移 | 电泳条件不合适 | 电泳时电压不应超过6V/CM，温度＜30℃，巨大DNA链电泳，温度应＜15℃，核查所用电泳缓冲液的缓冲能力，注意经常更换 |
DNA变性 | 电泳前勿加热，用TE缓冲液稀释DNA | |
带弱或无DNA带 | DNA上样量不够 | 增加DNA上样量，聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度高，上样量可适当降低 |
DNA降解 | 实验过程避免核酸酶污染 | |
DNA跑出凝胶 | 缩短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度 | |
EB染色的DNA，所用光源不合适 | 应用短波长（254nm）的紫外光源 | |
DNA带缺失 | DNA跑出凝胶 | 缩短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度 |
分子大小相近的DNA带不易分辨 | 增加电泳时间，核准正确凝胶浓度 | |
DNA变性 | 电泳前勿加热，用20mM Nacl 缓冲液稀释DNA | |
DNA链巨大，常规凝胶电泳不合适 | 在脉冲凝胶电泳上分析 | |
电泳时Ladder扭曲 | 配胶的缓冲液和电泳缓冲液不是同时配置 | 同时配置，电泳缓冲液高出液面1-2mm即可 |
电泳时电压过高 | 电泳时电压不应超过6V/CM |