PEI转染手册

转染操作流程：
 
  1、细胞传代：

转染前24h内分离293T细胞至含10％胎牛血清的DMEM培养基 中进行传代培养，接种密度如下：
         6孔板：0.5x10⁶细胞
         10cm培养皿：4.0x106细胞
         15cm培养皿：9.0x106细胞

2、转染

转染前将所有试剂置于室温。

2.1质粒DNA的稀释

在无菌试管中，用无血清的DMEM W / O酚红培养基（浓度为10％）稀释质粒DNA（ug）。病毒包装体（psPAX2）：病毒包膜（pMD2G）和重组质粒DNA的稀释比例分别为4:2:1。
       

6孔板：200ul+3ug的DNA
        10cm培养皿：1ml+7-8ug的DNA
        15cm培养皿：2ml+11-12ug的DNA

   2.2 转染复合体形成

将PEI（1ug/uL）加入已稀释的总DNA中，PEI与DNA（ug）的混合比率为3:1。加入后立即涡旋混合。
      

 6孔板：9ul PEI复合体（1ug/ul）=9ug
        10cm培养皿：21ul PEI复合体（1ug/ul）=21ug
        15cm培养皿：33ul PEI复合体（1ug/ul）=33ug
将添加到细胞的DNA/ PEI的混合物在室温下孵育15分钟。

4、收获转染细胞

转染后48小时内收获转染细胞/或病毒上清。
 
试剂的配制：
PEI（1ug/ul）
1、将无内毒素的无菌水加热至80℃左右溶解PEI，冷却到室温。
2、调整pH值至7.0，用0.22um的滤器过滤消毒，分装后储存在-20℃。工作液可保持在4℃

订货信息

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