glenresearch 60-5000-96说明书
时间：2024-01-23 阅读：425
glenresearch 60-5000-96说明书
Quenching buffer for Glen-Pak™ purification reagent RNA purification
Glen Pak的原则™ DNA/RNA纯化
与Poly Pak一样™ 墨盒，Glen Pak™ 盒利用保留在寡核苷酸上的5’DMT将全长序列特异性结合到支持物上。在纯化过程中，故障序列被消除，DMT随后被去除，从而允许纯化产物的洗脱。
与传统固相相比，Glen-Pak净化系统有许多优点
萃取（SPE）系统。
多才多艺
直接纯化寡核苷酸，无需任何预纯化干燥步骤，来源：
♦ 氢氧化铵
♦ AMA（氢氧化铵/40%甲胺水溶液1:1）
♦ 叔丁胺/水1:3（v/v）（1）
♦ 甲醇中的50mM碳酸钾（2）
♦ 甲醇/水中0.4M氢氧化钠4:1（v/v）（3）
使用适用于手持式注射器、真空歧管或高通量96孔板的筒。
（1） 加载前，用100 mg/mL氯化钠1:7（v/v）稀释叔丁胺/水溶液。
（2） 稀释50mM钾
Purification of DNA Oligonucleotides (DMT-ON)
Materials Amount Used
Glen-Pak DNA Purification Cartridge (60-5100-XX, 60-5200-XX) 1
Vacuum manifold (96 well or 12-24 port SPE type, if appropriate) 1
HPLC Grade Acetonitrile 0.5mL
2.0M Triethylamine Acetate (60-4110-XX, TEAA, pH7) 1mL
100 mg/mL Sodium Chloride 1mL
Salt Wash Solution (5% Acetonitrile in 100mg/mL Sodium Chloride) 2mL
2% Trifluoroacetic Acid (TFA)/Water (60-4040-57) 2mL
Deionized Water 2mL50% Acetonitrile/Water containing 0.5% ammonium hydroxide* 1mL
程序
样品制备
1.DNA合成后，在1mL氢氧化铵或氢氧化铵/甲胺（AMA）中正常脱保护DMT-ON寡核苷酸。不需要冷冻干燥脱保护溶液。为了使该程序成功，合成必须进行DMT-ON。碱不稳定的保护基团必须用AMA或氢氧化铵（1.0mL）去除。
2.向脱保护的DMT-ON寡核苷酸中加入1mL 100 mg/mL氯化钠溶液，最终体积为2mL。样品的最终盐浓度必须在50 mg/mL左右，以便在试剂盒上装载寡聚物。可能会加载更大的卷，但这是我们建议在盒带上加载的卷。
墨盒准备
3.将所需数量的150 mg药筒放入输出导向器下方机架中的歧管和收集管（如果需要）的阴鲁尔端口中。我们通常使用12端口歧管。
4.打开真空，使用真空控制阀将压力调节至~7mm Hg。（如果歧管上没有可用的控制阀，则将流速设定为每秒1-2滴左右）。使用0.5mL乙腈和1mL 2M TEAA对滤筒进行处理。
乙腈冲洗树脂上的有机残留物并将其润湿，而TEAA作为离子配对试剂来增强DMT-ON寡核苷酸与树脂的结合。
净化程序
5.将低聚/盐混合物以1mL等分试样的形式涂抹在试剂盒上（收集洗脱液并保存，以防装载失败或错误）。在装载过程中，DMT-ON寡聚物倾向于粘附在卡盘填料上，而大多数故障序列没有保留下来。
6.用2 x 1mL的盐洗液清洗滤筒。这将清除盒带中剩余的故障序列。
7.用2 x 1mL的2%TFA冲洗滤筒。拆卸DMT时，可能会看到微弱的橙色条带