鱼胆囊收缩素/肠促胰酶肽（CCK）定量检测试剂盒（ELISA）

使用说明书

仅供科研使用，不得用于医学诊断。

使用前仔细阅读本说明书。

用    途： 用于定量检测鱼血清、血浆及相关液体样本中胆囊收缩素/肠促胰酶肽（CCK）的含量。

工作原理

本试剂盒采用双位点夹心酶联免疫吸附法（ELISA），测定样品中鱼胆囊收缩素/肠促胰酶肽（CCK）的水平。向预先包被鱼胆囊收缩素/肠促胰酶肽（CCK）抗体的酶标孔中加入标准品、待测样本和HRP标记的鱼胆囊收缩素/肠促胰酶肽（CCK）抗体，经过温育和洗涤，去除未结合的组分，然后再加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅与样品中兔子鱼胆囊收缩素/肠促胰酶肽（CCK）的浓度呈正相关。

试剂盒组成

注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml

需要而未提供的试剂和器材

1．  37℃恒温箱。

2．  标准规格酶标仪。

3．  精密移液器及一次性吸头

4．  蒸馏水，

5．  一次性试管

6．  吸水纸

注意事项

1．  从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．  各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差

3．  建议所有标准品、样本都做双份检测。

4．  严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

5．  为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

6．  不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

7．  底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中

标本要求

1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

操作程序

1．  分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入标准品50μl；在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。轻轻晃动混匀，37℃温育60分钟。

2．  弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。

3．  每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

4．  取出酶标板，每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

5．  测定：以空白孔调零，在450nm波长下测量各孔的吸光度值（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

6．  根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的，其实际浓度应该乘以总稀释倍数。

操作程序总结：

准备试剂，样品和标准品

加入准备好的样品、标准品和酶标试剂，37℃反应60分钟

洗板5次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

加入终止液

15分钟之内读OD值

计算

检测范围：7.8-500pg/ml。

规格：    96T/盒

保存：    2-8℃

有效期：  6个月（2-8℃）。