组件高效液相色谱柱这也称为固定相。这是高效液相色谱机器的核心，由多种物质通常二氧化硅中的一种制成，二氧化硅和过量碳反应，碳链是非极性的，因此碳链越长，色谱柱的非极性越大。含有 18 个碳链的色谱柱是常用的，称为 C18 色谱柱。高效液相色谱样品样品类型因领域和相关化合物的类型而有很大差异。高效液相色谱可用于分析生物样本（尿液、血液、唾液和肌肉）、环境样本、药物化学（药物）和微生物学（真菌和细菌产生的毒素）中的化合物。进样将样品注入高效液相色谱柱。这曾经是手动执行的，经过升级改造后大多数仪器都能实现自动进样，这样更高效便捷，减少了手动输入并允许更高的检测量。

 

高压泵将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂泵人装有填充剂的色谱柱(固定相)中，样品溶液经进样器进入流动相，样品中的各组分在固定相和流动相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附-分解-吸附的分配过程，进行分离后依次进入检测器，由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色谱信号或进行数据处理而得到分析结果。

 

流动相这实际上只是水和有机溶剂的混合物。流动相之所以得名，是因为它移动通过色谱柱，同时从色谱柱中洗脱化合物，化合物通常沿浓度梯度洗脱，非极性溶剂的百分比同时增加，流动相逐渐变得更加非极性。高效液相色谱运行高效液相色谱可以以多种模式进行。常用的方法称为反相，在这种模式下，化合物从极性*强的化合物开始，到非极性化合物结束。对于正相模式，高功率泵将样品和流动相移动通过色谱柱，运行可能需要 10-60 分钟。高效液相色谱图 高效液相色谱图显示了化合物从化学反应中的分离，色谱图是在 254 nm 处查看的。两个主峰出现在 8.20 和 9 分钟，代表具有这些保留时间的两种化合物。吸光度单位 (AU) 的数量显示在 Y 轴上，而运行时间显示在 X 轴上。应用在生物学和医学领域，高效液相色谱通常用作分析生物和环境样品是否存在已知化合物（例如代谢物、药物、毒素、杀虫剂）的分析工具，并可帮助识别未知化合物。然而，在化学领域，高效液相色谱通常用于监测化学反应以及确定产品的纯度。