如何选择一根合适的液相色谱柱?
时间:2021-06-02 阅读:453
如何知道应该选用什么色谱柱是实验中很重要的部分,一些实验分析只能选定一种特定的色谱柱,有的分析方法虽然可以选用相同的色谱柱也可以工作,但对实验结果可能会存在一定的问题。所以选择的色谱柱是否正确,是否经过色谱仪方法调试后可以直接使用,色谱柱的选择对分析方法是否成功是非常重要的问题!本次小编带大家一起学习色谱柱的选择。
一、色谱柱选择一般方法
色谱柱选择一般有药典方法、国标或者行业监测标准的,先可以按照方法来选产品,也可以向供应商请求技术支持;如果没有固定的方法需要自己开发,可以查一些文献,看看之别人做的时候用的什么柱子,再做个对比选择,如果实在没有参考的话,就需要按照色谱柱选择原则来选。
选择一个固定相,根据分析对象的选择性、性和固定相分子中苯基含量进行仔细判定;
要了解色谱柱直径如何影响柱效、溶质保留值、柱头压和载气流速等因素;
确定多长的柱长会影响溶质的保留值、柱头压及成本;
从柱容量、惰性、流失和温度上限出发,正确评估薄、厚液膜色谱柱的不同。
选择色谱柱,先需要确定要使用的是填充柱还是毛细管柱。填充柱比毛细管柱具有更高的样品容量,虽然这一差距由于发明了大孔 530mm 毛细管而大大缩小。检测器灵敏度的改进也减少了对大剂量样品的需要。填充柱可能具有优势的域是气体样品的分析。现代液相色谱中,分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。1、色谱柱材料:这种材料必须尽可能是惰性的,尤其是对于痕量分析或容易拖尾的化合物,例如硫醇或类似的活性化合物。对于毛细管柱,熔融石英是可选的材料。有两种类型的熔融石英毛细管柱:壁涂开管柱 (WCOT) 色谱柱和多孔层开管柱 (PLOT) 色谱柱。WCOT 色谱柱是固定相液膜涂渍在去活的色谱柱壁上。这是气相色谱中较常用的色谱柱。PLOT 色谱柱中固定相是固体物质涂渍到色谱柱壁上。2.固定相:选择毛细管柱时,先需要确定是否需要 PLOT 色谱柱。下面是 3 种 PLOT 色谱柱的典型应用域:分子筛不挥发气体,对水比较敏感二乙烯基苯 (DVB) — HP-PLOT Q C1 到 C3 全部异构体的分离,部分 C4 和更高的(直到 C14)的异构体分离,性化合物,挥发性溶剂可以允许含水氧化铝 Al2O3 C1 到 C10 异构体的分离, 对水比较敏感。正相色谱:正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica),以及其他具有性官能团,如胺基团(NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他团的性较强,因此,分离的次序是依据样品中的各组份的性大小,即性强弱的组份先被冲洗出。反相色谱:反相色谱填料常是以硅胶为基础,表面键合有性相对较弱的官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相性较强,通常为水,缓冲液与甲醇,已腈等混合物。样品检测出的顺序是性较强组合先被冲出,而性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有C18(ODS)、C8(MOS)、C4(B)、C6H5(Phenyl)等。聚合物填料:聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,其主要优点是在PH值为1~14均可使用。相对与硅胶基质的C18填料,这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离有帮助。现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料,色谱柱柱效较低。其他无机填料:其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化。由于其特殊的性质,一般于特殊的用途。如石墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料。这种填料的分离不同与硅胶基质烷基键合相,石墨化碳的表面即是保留的基础,不再需其它的表面改性,该柱填料一般比烷基键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强,石墨化碳可用于分离某些几何导构体,又由于HPLC流动相中不会被溶解,这类柱可在任何PH与温度下使用。氧化铝也可用于HPLC,氧化铝微粒刚性强,可制成稳定的色谱柱柱床,其优点是可在PH高达12的流动相中使用。但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强,应用范围受到一定的限制,所以未能广泛应用,新型氧化锆填料也可用于HPLC,商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱,应用PH范围1~14,温度可达100℃。由于氧化锆填料几年才开始研究,加之面临的实验难度,其重要用途与优势尚在进行中。