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进口氨基酸分析仪:
随着我国饲料工业的发展,鱼粉的需要量逐年增加,鱼粉的质量问题越来越引起饲料行业、养殖业的重视。鱼粉是水产饲料的主要蛋白源,尤其含有动物生长所必需的氨基酸,由于鱼粉用量大,价格高,有些厂家掺杂使假、以次充好,使鱼粉质量参差不齐,这一行为业给鱼粉品质分析带来了一定困难。因此,有必要建立一个有效的手段对鱼粉中氨基酸进行定量分析。
进口氨基酸分析仪
以下是谱祥利用LC高效液相色谱仪对鱼粉进行的HPLC检测方案。
1、仪器与试剂
1.1仪器、设备
高效液相色谱仪
SMA 色谱柱AA:250mm×4.6mm×5μm
分析天平
恒温箱,温度控制在110±1℃
微量进样器,(20μL)一支
漩涡混匀器
氮吹仪
针头过滤器
微孔滤膜:0.45µm
1.2试剂
盐酸溶液,6mol/L:将优级纯盐酸与水按1:1(V/V)混合。
氨基酸标准工作溶液。
乙腈,色谱纯。
三水合醋酸钠,优级纯。
冰醋酸。
正己烷,色谱纯。
2、供试品溶液和对照品溶液的制备
对照品溶液的制备 取氨基酸混合工作标液500ul,用水稀释至5ml,即得。
供试品溶液的制备 称取试样50-100mg(准确至0.1mg)于据塞试管中,加入6.0mol/l盐酸10ml,混匀,充分提取10min,盖紧盖子。将样品置于110℃恒温干燥箱中,水解22-24h。冷却后充分混匀,过滤。根据实验要求移取适量上清液,60℃下氮气吹干,备用。以下按照衍生方法包进行。
方法包衍生方法:将恒温水浴锅预热至50±1℃,分别将A、B两种衍生试剂用稀释至原来浓度的1/5倍。精密量取上述对照品1ml,至于试管中,加入稀释后的A溶液0.5ml和稀释后的B溶液0.5ml,摇匀;在50±1℃的水浴中加热45分钟,取出,加入正己烷溶液1ml,振摇;并用孔径为0.45μm有机膜过滤,放置30min后,取澄清的下层液进行分析实验。供试品的衍生步骤与对照品相同。
3、色谱条件
色谱柱:AA 4. 6 mmx250 mm,粒度5 µm
流动相:
流动相A:0.1mol/L醋酸钠溶液(pH6.5):乙腈=93:7
配置方法:准确称取三水合醋酸钠13.6g于1000ml水中,搅拌均匀,溶解,用冰醋酸或氢氧化钠溶液调节pH值至6.5; 准确量取配制好的三水合醋酸钠溶液465ml和乙腈35ml,混合均与,抽滤,过0.45μm滤膜。
流动相B:水:乙腈=20:80。
配制方法:准确量取水100ml和乙腈400ml,混合均匀,抽滤,过0.45μm滤膜。
波长:254nm
流速:1. 0 mL/min
梯度设置:
T(min) | A% | B% |
0.01 | 100.0 | 0.0 |
11 | 93.0 | 7.0 |
13.9 | 88.0 | 12.0 |
14 | 85.0 | 15.0 |
29 | 66.0 | 34.0 |
32 | 30.0 | 70.0 |
35 | 0.0 | 100.0 |
42 | 0.0 | 100.0 |
45 | 100.0 | 0.0 |
60 | 100.0 | 0.0 |
4、测定法
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20ul,注入液相色谱仪,测定,即得