二氧化碳培养箱的无污染技术
时间:2015-05-21 阅读:745
二氧化碳培养箱是通过在培养箱箱体内模拟形成一个类似细胞/组织在生物体内的生长环境,如稳定的温度(37°C)、稳定的CO2水平(5%)、恒定的酸碱度(pH值:7.2-7.4)、较高的相对饱和湿度(95%),来对细胞/组织进行体外培养的一种装置。
广泛应用于细胞、组织培养和某些特殊微生物的培养,常见于细胞动力学研究、哺乳动物细胞分泌物的收集、各种物理、化学因素的致癌或毒理效应、抗原的研究和生产、培养杂交瘤细胞生产抗体、体外授精(IVF)、干细胞、组织工程、药物筛选等研究领域。在生物活体内,生物体有自身的免疫系统保护细胞或组织,但是在体外培养时,没有任何保护自己的免疫屏障。
对于二氧化碳培养箱的基本参数温度、CO2和湿度,大多数培养箱都能满足研究实验的需要。然而,针对培养过程中面临的各种污染源,各品牌二氧培养箱的控制方式和效果不尽相同,因此细胞体外培养中zui大的威胁实际上是污染问题。二氧化碳培养箱中的主要污染源:细菌、真菌(霉菌和酵母菌)、病毒、支原体以及非同种细胞对于细胞来说,非常理想的培养环境同样也适合这些污染源的生存,培养箱本身是不会辨别的,而细胞培养中大部分时间里细胞都是被放置于培养箱内,因此箱体内能否抑菌或灭菌非常关键!
细菌:细菌污染后,培养基1-2天就会浑浊变黄,对细胞生长影响明显,应迅速将污染细胞与其它细胞系隔离,灭菌后丢弃,还要用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台。病毒:由于病毒寄生生存,爆发后尽快和正常细胞隔离,丢弃处理,相对来说容易处理,病毒污染对操作者威胁较大;尽管病毒污染的细胞不影响原代培养,但生产疫苗是不安全的。潜在的病毒污染是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题。
真菌(霉菌和酵母菌):真菌污染后培养液不变浑浊,不象细菌污染那么容易被发现,真菌污染是细胞培养中zui常见的一种污染;污染后细胞生长的比较慢,目前没有好的抑制方法,包括现在常用的两性霉素,一旦污染容易反复爆发,尤其孢子很难杀灭。
支原体:支原体污染细胞后,不会使细胞死亡且可以与细胞长期共存,培养基一般不发生浑浊,多数情况下细胞病理变化轻微或不显著,细微变化也可由于传代、换液而缓解,外观上给人以正常感觉,往往被大多数实验者忽视,实则细胞已经受到多方面潜在影响,如引起细胞变形,影响DNA合成,抑制细胞生长等。非同种细胞:即细胞交叉污染,由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开,往往会使一种细胞被另一种细胞污染。目前,世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染,致使许多实验宣告无效。