色谱柱的清洗和再生方法
时间：2013-03-06 阅读：3255
除非特殊说明，在所有情况下，所用溶剂的体积应该是色谱柱体积的40-60倍。
应在清洗过程开始和结束时各测一次柱效和容量因子等，比较色谱柱性能的改善，以确定清洗的效果。
确保色谱柱中没有样品和缓冲溶液，清洗前所用的溶剂应与zui初清洗时所用的溶剂相溶。
应确保实验测试时所用的流动相与色谱柱中zui后的溶剂相溶。
1正相填料
用四氢呋喃冲洗。
用甲醇冲洗。
用四氢呋喃冲洗。
二氯甲烷冲洗。
用无苯正己烷冲洗。
2反相填料
用HPLC级水冲洗，冲洗时进4等份的200μl的二甲亚砜（DMSO）。
用甲醇冲洗。
用氯仿冲洗。
用甲醇冲洗。
3阴离子交换填料
用HPLC级水冲洗。
用甲醇冲洗。
用氯仿冲洗。
4 阳离子交换填料
用 HPLC 级水冲洗；在冲洗的过程中进4 等份200μl 的DMSO
四氢呋喃冲洗。
5 蛋白质凝胶过滤填料
去除蛋白质尺寸排阻介质中的污染物有两种清洗/再生的方法。
弱保留蛋白质
用30moL/L pH3.0 磷酸盐缓冲液冲洗。
强保留蛋白质
用100%的水到100%的乙腈梯度洗脱60min。
6多孔石墨化碳
多孔石墨碳有四种再生的方法，选用哪一种方法依赖于被分析物和所用的溶剂。
酸碱再生
适合于使用极性流动相分析离子类分析物。
将色谱柱倒装
用50ml含0.1%三F乙酸的四氢呋喃／水（1:1）溶液1ml/min流速冲冼。
用50ml含0.1%三乙胺或氢氧化钠的四氢呋喃／水（1:1）溶液1ml/min流速冲冼。
用50ml含0.1%三F乙酸的四氢呋喃／水（1:1）溶液1ml/min流速冲冼。
用95%甲醇水溶液冲洗重新平衡。
将色谱柱改为正向。
作者：英国的R.Plumb-Glaxo
强有机溶剂再生
适合于水相分析极性或离子类分析物。
用50ml丙酮以1ml/min流速冲洗。
用120ml二丁醚以1ml/min流速冲洗。
用50ml丙酮以1ml/min流速冲洗。
用水冲冼至平衡。
正相再生
适合于主要使用正相流动相的多孔石墨化碳柱。
用50ml二氯甲烷以1ml/min流速冲洗。
用50ml甲醇以1ml/min流速冲洗。
用50ml水以1ml/min流速冲洗。
用50ml 0.1mol/L盐酸以1ml/min流速冲洗。
用50ml水以流速1ml/min冲洗。
用50ml甲醇以1ml/min流速冲洗。
用50ml二氯甲烷以1ml/min流速冲洗。
用流动相冲冼至平衡。
作者：瑞典的A.Karlsson-Uppsala
三F乙酸的去除
适合于流动相中含有三F乙酸的多孔石墨化碳柱。
用加热到75℃的乙腈冲洗，同时色谱柱也要保持在这一温度。
7 带金属抗衡离子的聚合物填料
基质是带金属抗衡离子的聚合物色谱柱，有三种再生方法，每种方法详细列于下表：
| 色谱柱类型 | 金属污染物 | 有机污染物 | 色谱柱清冼 |
| 氢离子型 | 用25℃的0.1mol/L的H2SO4溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4—16小时 | 用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4小时 | 用65℃的20:80的ACN:0.01NH2SO4溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4小时 |
| 钙离子型 | 用25℃的0.1mol/L pH6.3的Ca（NO3）2溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4—16小时 | 用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4小时 | 用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4小时 |
| 钠离子型 | 用85℃的0.1mol/L 的NaNO3溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4—16小时 | 用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反相冲冼4小时 | 用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4小时 |
| 银离子型 | 没有再生过程的报导。 | 用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4小时 | 用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4小时 |
| 铅离子型 | 用85℃的pH 5.3的0.1M Pb（NO3）2溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4—16小时 | 用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4小时 | 用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4 |