普鲁士蓝染色液(核固红法)操作说明
时间:2016-01-19 阅读:4723
普鲁士蓝染色液(核固红法)
产品简介:
含铁血黄素(Hemosiderin)是一种血红蛋白源性色素,为金黄色或棕黄色颗粒,因其
含铁,且为金黄色,故称为含铁血黄素。当红细胞被巨噬细胞吞噬后,在溶酶体酶的作用下,
血红蛋白被分解为丌含铁的橙色血质和含铁的含铁血黄素。 Perls 普鲁士蓝反应(Prussian
blue reaction)又称为含铁血黄素染色,即经过亚铁青化钾和稀酸处理后可以产生蓝色,常
见于吞噬细胞或间质内,其染色原理在于亚铁青化钾溶液使三价铁离子从蛋白质中被稀盐酸
分离出来,三价铁不亚铁青化钾反应,生成一种丌溶解的蓝色化合物即三价铁的亚铁青化物。
Leagene 普鲁士蓝染色用于显示局部组织内的各种出血性病变,常见于吞噬细胞内,
可以很好地区分含铁血黄素不其他色素。该染色液稳定性好、可以长期保存、丌易产生沉淀、
应用范围广,可以进行复染。该染色液的复染液采用核固红,是zui经典、zui常用的复染液。
产品组成:
名称
2×50ml 2×100ml
试剂(A):
A1: Perls stain A
25ml
25ml
50ml
50ml
RT
RT
Perls stainB A2: Perls stain
临用前,取 A1、A2 等量混合即为 Perls stain,丌宜提前配制。
试剂(B): 核固红染色液
50ml
100ml
RT 避光
使用说明书
1 份
自备材料:
1、固定液:10%中性福尔马林、4%多聚甲醛等
2、系列乙醇
操作步骤(仅供参考):
(一)石蜡切片染色:
1、组织固定于 10%中性福尔马林,常规脱水包埋。
2、切片厚度 4μm,常规脱蜡至水。
3、蒸馏水水洗 1min。
4、切片入 Perls stain(见注意事项 2),浸染 15~30min。
5、蒸馏水充分冲洗 2~5min。
6、入核固红染色液,淡染细胞核 5~10min。
7、自来水冲洗 1~5s。
8、常规脱水透明,中性树胶封固
(二)冰冻切片染色:
1、无需脱蜡,直接迅速用蒸馏水冲洗 2~3min。
2、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤,时间可以相应缩短。
(三)细胞染色:
1、4%多聚甲醛固定 10~20min。
2、自来水冲洗 2 次,每次 2min。
3、蒸馏水冲洗 2 次,每次 2min。
4、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤,时间可以相应缩短。
染色结果:
含铁血黄素或三价铁
细胞核、其他组织
蓝色
红色
阴性对照(可选):
取相同切片脱蜡至水。入 5%草酸孵育 2~6h,经 Perls stain,其余步骤同上。结果为阴性。
注意事项:
1、 切片脱蜡应尽量干净。组织固定常采用 10%中性福尔马林,经普通福尔马林长期固定
后,组织会有损伤。避免使用酸性固定剂,铬酸盐处理也会妨碍铁的保存。
2、 整个操作过程中容器要干净,避免用金属铁制品,洗切片和容器时以蒸馏水为宜,因普
通水内含铁质。Perls stain 染色时,应根据样本情况调整着色时间。
3、 所有切片都应使用同一个阳性对照切片,选择适合的对照非常重要。尸检肺组织是一个
很好的对照,包含相当数量的铁阳性巨噬细胞(心衰细胞)。
4、 冰冻切片和细胞染色,根据具体情况摸索实验条件。
有效期: 12 个月有效。
相关产品:
产品编号
DC0032
DM0007
TC1213
产品名称
Masson三色染色液
瑞氏-姬姆萨复合染色液
总胆固醇(TC)检测试剂盒 (COD-PAP单试剂比色法 )