Invitrogen脂质体2000

美国Invitrogen脂质体2000

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具体成交价以合同协议为准
2018-04-22 13:53:16
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上海瑶韵生物科技有限公司

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产品简介

Invitrogen脂质体2000可用于有血清培养基的转染,并且转染前后不需要换培养基,使得操作方便了许多,但是要注意制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂,因为血清会影响复合物的形成。

详细介绍

美国Invitrogen脂质体2000用量
Lipofectamine 2000用的剂量根据说明书,24孔板转染每次用2ul左右,1.5ml Lipofectamine 2000大约可做750次24孔板转染,或者大约150次6孔板转染。
美国Invitrogen脂质体2000注意事项     
美国要求细胞铺板密度较高,以90%-95%为佳,这有助于减少阳离子脂质体细胞毒性造成的影响。Lipofectamine 2000可用于有血清培养基的转染,并且转染前后不需要换培养基,使得操作方便了许多,但是要注意制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂,因为血清会影响复合物的形成。
复合物形成后是可以加入血清。这里要特别注意检测所用的无血清培养基是否能和Lipofectamine 2000匹配,比如已知CD293, SFMII,VP-SFM就不行。此外还应该留意,如果研究的基因要求比较长的表达时间,比如细胞周期相关基因,或者时细胞表面蛋白,选择细胞铺板密较低的转染试剂,不适合用Lipofectamine 2000。
对于大多数阳离子脂质体试剂,应优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到zui大的转染效率。DNA和转染试剂的比例,通常推荐是1:2或者1:3,优化可以从0.5-5之间慢慢试。使用小剂量确定的优化条件可以用于进行大剂量的转染,只要根据培养板表面比例线性增加铺板细胞的数目、阳离子脂质体试剂和DNA量就可以了。
还有转染的时候培养基中不能添加抗生素。抗生素,比如青霉素和链霉素,一般对于真核细胞无毒,但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性,使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性,导致转染效率低。所以,在转染培养基中不能使用抗生素,甚至在准备转染前进行细胞铺板时也要避免使用抗生素。这样,在转染前就不必润洗细胞。对于稳定转染,不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素,因为这些抗生素是GENETICIN选择性抗生素的竞争性抑制剂。另外,为了保证无血清培养基中细胞的健康生长,使用比含血清培养基更少的抗生素量。
阳离子脂质体应该在4度保存,要注意避免多次反复长时间开盖,因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。当然还有要注意质粒的质量,质粒的内毒素是转染的大敌。
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