UHPLC-CMS 法分析非离子型造影剂碘己醇
时间：2024-10-31 阅读：131
碘己醇是一种广泛使用的非离子型造影剂，用于提高 X 射线分析的对比度，低渗透的特性可以使其通过肾脏快速清除，防止再吸收和进一步代谢，这使得碘己醇比其他造影剂使用更安全。在许多临床成像应用中，造影剂可以提高扫描的对比度和空间分辨率，但由于造影剂的毒性和副作用，其已知浓度的制剂及其纯度分析对于它们的安全使用和准确诊断非常重要。本文介绍了一种简便、准确的 HPLC-CMS 分析碘己醇的方法。
实验方法
实验试剂
应用中使用的所有溶剂均为 HPLC 级。两个碘己醇标准品：一个是纯度为 99.99% 的认证参考物质，第二个纯度≥95%。
实验仪器
所有实验均在 AIS expression® CMS 上进行，与 AVANT™ UHPLC 系统联用，参数如表 1 所示。
HPLC/UV/MS 分析碘己醇（100微克/毫升）
在室温下，碘己醇会发生异构化，在 HPLC/UV/MS 分析中可以检测到两个峰。
这两个峰 ( 图1A ) 是由于在碘己醇的中心苯环上附着了大量的碘原子，从而阻碍了苯环上酰氨基的N-乙酰基团的旋转。这两种化合物本质上是“旋转异构体”，在室温下在水溶液中缓慢互换。
图1：(A) 碘己醇的 HPLC 图（254nm），(B) 质子化碘己醇的提取离子图（m/z 821.8），(C) 在保留时间 4.06 分钟处峰值的平均质谱图。
两个峰通过质谱（MS）分析确认，显示出相同的质荷比（m/z）为821.9（见图 1B 和 1C），并且在它们的源内碰撞诱导解离（CID）质谱图中没有可见差异（见图 2A 和 2B）。在x射线分析中，两个旋转异构体都发挥作用。
图2：(A) 在保留时间 3.61 分钟处峰值的平均源内 CID 质谱图，(B) 在保留时间 4.06 分钟处峰值的平均源内 CID 质谱图。
HPLC/UV法进行纯度分析
通过比较相同浓度下碘己醇样品与碘己醇认证标准品的 HPLC 响应，样品与认证标准品的峰面积比可快速进行浓度和纯度分析。
计算碘己醇浓度比的公式如下:
碘己醇样品和认证标准品的 HPLC 图谱如图 3A 和 3B 所示。
碘己醇样品的两个峰面积之和的平均值为 714 (图3A)，碘己醇认证标准品的平均值为 740 (图3B)。通过浓度配比计算，计算得到样品中碘己醇的浓度为 0.0964mg/ml，纯度为 96.4%，符合规定的产品纯度 ≥95%。
图3: (A) 碘己醇样品 (0.1mg/ml) 的 HPLC 图谱 (254nm); (B) 碘己醇标准品(0.1mg/ml) 的 HPLC 图谱(254nm)。
为了更准确地测定碘己醇样品的纯度，在 25-500μg/mL 的五种不同稀释水平下，对每种浓度进行三次测试，建立了碘己醇认证标准物质的校准曲线。得到的线性校准曲线的相关系数为 0.9999 (图4)，显示出良好的线性。
图4: 碘己醇 HPLC 色谱标度曲线 (254nm)
采用碘己醇校准曲线法，测定碘己醇样品的纯度为 97.5%，高于样品规定的低纯度95%，与通过比值计算得到的测量值仅相差 1.1%。因此对于认证的参考标准物质，通过校准曲线的方法或直接紫外响应比分析的方法都可以用于具有紫外吸收的有机化学品的纯度测定。
实验结论
Advion Interchim Scientific® AVANT™ (U)HPLC系统能够为造影剂碘己醇的纯度分析提供准确的测试方法。UHPLC-CMS 联用，不仅可以确认目标化合物，还可以快速确定杂质。