如何解决色谱柱使用过程出现的问题
时间：2014-12-29 阅读：3154
不同色谱柱间差异
使用期间柱变化
原因:
填料、键合相不同
柱床破坏
键合相丢失
硅胶基质溶解
强保留组分堆积堵塞
表现:
保留因子(k)，分离因子(α)
柱效(N)
保留因子(k)，分离因子(α)
柱效(N)
保留因子(k)，柱效(N)
问题:
柱外效应
原因:
系统差异、进样量大、进样阀与色谱柱之间、色谱柱与检测器之间的管路太长、检测器流通池体积大、接头死体积大等。
表现:
柱效（N)
问题:
分离效果变差
原因:
流动相组分改变
流速改变
温度改变
表现:
保留因子(k)，柱效变化很小
保留因子(k)，分离因子（α）
保留因子(k)，柱效变化很小
问题:
柱平衡慢
原因:
重新平衡时间不够
柱超载 样品量太大
表现:
保留因子(k)，柱效变化很小
保留因子(k)，柱效(N)
造成色谱峰（ 不对称）拖尾的原因
1．色谱柱本身填装问题,筛板堵塞或填料塌陷；
2．柱头有污染；
3．样品超载；
4．样品溶剂不合适；
5．柱外效应；
6．化学或二次保留（硅羟基）效应；
7． 缓冲容量不足或不合适；
8． 重金属污染。
如何解决峰形拖尾的问题
A. 与化学有关的拖尾问题
1．流动相中，加入30mM的三乙胺（用于碱性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物）， 未知化合物加醋酸三乙胺；
2．如仍然拖尾，将三乙胺换为二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；
3.降低进样量至<1μg。
B. 与色谱柱有关的拖尾问题
1.如柱头处有强保留的样品组分积聚，反相柱可用20倍柱体积的96%的二氯甲烷与4%甲醇，加1%氢氧化铵混合液冲洗；正向柱可用甲醇冲洗；
2.使用保护柱。
C. 与HPLC系统有关的峰拖尾和峰加宽
1.进样体积过大，（通常≤25μL）；
2.进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大（*连接管应<20cm，内径为0.007"）；
3.检测器流通池的体积过大。