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关于细胞培养过程中会遇到的常见问题解决措施

时间:2019-01-09      阅读:2568

一、判断细胞污染的方法: 

状态1:细胞培养液变浑浊了,经常见到是米汤样,黄色液体,一般认为细菌污染。 
状态2:细胞培养基内含有能动的小黑点,一般认为是黑胶虫。 
状态3:胞培养基清亮,但是能看到飘在培养液带有毛毛的白色的菌状物质,有可能就是真菌感染。 
应对措施:细胞污染了就直接扔了,还得把培养箱用酒精棉球擦干净,并用紫外照射半小时,防止再次污染。同时建议细胞培养时,在培养基中加入青链霉素(尤其是初学者) 

二、胞培养过程中,细胞周围包括细胞上有很多小黑点怎么办? 

策略1:用胰酶消化下来后,低速短时间离心,不同实验室不一样,如果平时是1000转5min的话,就可以改为700转3min,用新的细菌培养瓶培养细胞,细胞收集是少一点,但是一般都能干净很多。多传几代就好多了。 
策略2:如果多次尝试之后还是不干净,就怀疑是否存在支原体污染了,用抗支原体药就OK了。一般用上3~5天,细胞就干干净净了。 

三、细胞胞质疏松,状态不好,养不起来怎么办? 

策略1:一般情况下,从血清下手就行,要么换好血清,要么提高血清浓度,血清浓度提高到15%~20%培养48h,换成正常10%的浓度,用高浓度的血清培养时间过长对细胞有毒性。 
策略2:血清下手之后可以同时采取提高细胞密度的方法,从培养瓶换到六孔板,12孔板等,细胞密度大,细胞分泌的细胞因子多,肿瘤细胞通过旁分泌途径促进细胞生长。 

预防策略:细胞胞质疏松,老化的原因在于细胞传代次数比较多,胰酶消化时间太长,这时候,一定要控制细胞传代次数,注意胰酶消化时间,胰酶消化时间过长,容易导致细胞状态不佳以及胞质疏松。有一招,元元没试过,可以尝试,将细胞冻起来,过段时间复苏,细胞会长得比较好。 

四、长途运输过来装满培养液的细胞如何处理
 
    很多人都会遇到从其他地方买来细胞或者快递运来细胞,装满培养基的培养瓶的细胞怎么处理的问题。
 
第1步:先放37℃培养箱放置4小时,这样细胞在通过长途跋涉以后得以稳定,观察细胞状态。 
第2步:将新鲜培养基和旧的培养基1:1稀释,如果细胞状态不好,可以将血清浓度提到15%,否则正常培养,这样有一个过渡期,不至于细胞换血清之后状态不佳,15%的血清培养48h之后换成正常浓度培养。 

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