培养基是细胞培养中*的营养成分，但是基础的培养基却给实验者带来了一系列的问题。

别小看细胞培养，这里可蕴含着大学问。

1.怎样查到一个特定细胞株的相关知识和培养条件？

ATCC（American Type Culture Collection）收集了绝大多数细胞的详细资料。打开ATCC网页的Cells and hybridomas链接，输入细胞名称就可以搜索ATCC的细胞数据库。数据库中有每一种细胞的详细描述，包括细胞的来源，培养和冻存条件，以及相关文献等资料。

2.如何选用特殊细胞系培养基？

培养某类型细胞没有固定的培养条件。MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样容易生长。总之，首-选MEM、DMEM做贴壁细胞培养；RPMI1640做悬浮细胞培养；

新的细胞培养时要详查资料。

3.自己新配制的液体培养基能保存多久？

我们建议将新配制的培养基放置于4℃，避光保存尽量在一周内使用完毕，培养基越新鲜越好。

4.培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？

一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在一到两周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

5.培养基中是否须添加抗生素？

除了特殊筛选系统外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。

为防止细菌、真菌污染，可以加入青霉素-链霉素双抗溶液，其培养基中的终浓度为青霉素100U/ml，链霉素为100ug/ml，但是不建议长期使用。

6.液体培养基可以放-20℃保存吗？

不可以！因为在-20℃下，培养基中的盐容易析出，培养基融化后，有的盐可能无法重新溶解，从而导致培养基渗透压降低，培养细胞时，细胞容易破裂而死亡。

7.为何培养基保存于4℃冰箱中，颜色会偏暗红色，且pH值越来越偏碱性？

培养基保存于4℃冰箱中， 培养基内之CO2 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中的酸碱指示剂(通常为phenol red) 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果， 将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时， 可以通入无菌过滤的CO2， 以调整pH 值。

8.为什么液体培养基1640颜色发黄，是pH值不对吗？

不是。因为配方原因，1640为减酚红型，其中酚红的浓度只有DMEM的四分之一，所以是因为酚红浓度低，而非PH值低。

9.培养液pH是怎样影响细胞生长的？

由于大多数细胞适宜PH值为7.2-7.4，偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对PH值要求也不*相同，原代细胞培养一般对PH值变动耐受差，无限细胞系耐受力强。

但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些，偏酸环境中更有利于细胞的生长。因此，配制培养用液时可把液体的PH值稍微调的偏酸一些。液体在经过0.1um或0.2um滤膜过滤时，PH值会向上浮动0.2左右。

10.培养液渗透压是怎样影响细胞生长的？

当细胞内、外环境的分子浓度不同时就会产生渗透压。这种情况下，水分通过渗透流入或流出细胞，从而改变细胞的内环境。

高渗透压迫使水分从细胞中扩散出来导致细胞收缩，这种情况会使DNA和蛋白遭到破坏，细胞周期停滞以及终使细胞死亡；反之，低渗透压使水分流入细胞内，使细胞肿胀破裂。

11.为什么有客户要求培养基中不含酚红？

研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，细胞培养，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加酚红的培养基。

12.酚红的作用是什么？

酚红在培养基中被用来作为PH值指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。

13.干粉培养基里含NaHCO3吗？

所有的干粉培养基中都不含NaHCO3 。

请依据说明书或包装袋上的标注，在干粉培养基*溶解后添加NaHCO3 。

14.NaHCO3的作用是什么？

与CO2一起形成缓冲系统，保持培养基PH值稳定。

15.我们实验室培养箱CO2浓度一直以来都是5%，这样可以吗？

当然不可以，不同的培养基要求添加NaHCO3的量不一样，如DMEM要求添加3.7g/L，为了保持PH值稳定，必须用高浓度的CO2平衡，一般不低于8%，而1640等要求添加NaHCO3 2.2g/L，还有些培养基要求添加更少，那么这些培养基就要求较低的浓度平衡，一般是5%。

16.培养基中丙-酮酸钠的作用是什么？

丙-酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙-酮酸钠。

丙-酮酸钠的贮存液浓度一般为50mM，-20℃保存，培养基中的终浓度为1mM.

17.谷氨酰胺的作用是什么？

几乎所有的细胞对谷氨酰胺都有较高的要求。谷氨酰胺脱掉氨基后，可作为培养细胞的能量来源，参与蛋白质的合成和能量代谢。在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。

谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20℃冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4度冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。

18.在培养基中加入HEPES有何好处？

培养基中-常用的Buffer system是碳酸氢盐，它可提供营养，但却在生理PH值条件下会降低缓冲能力。而HEPES是一种很强的Buffer，加入HEPES能使细胞培养基在PH7.2-7.6条件下缓冲能力增强。

Hepes的贮存液浓度一般为1M，常温保存。培养基中的终浓度为25mM，即5ml 1M的Hepes加入到200ml*培养基中。

19.GlutaMAX-Ⅰ是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-Ⅰ？这个二肽有多稳定？

GlutaMAX-Ⅰ是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的a-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。

GlutaMAX-Ⅰ二肽非常稳定，即使在121℃灭菌20min， GlutaMAX-Ⅰ二肽溶液有小的降解；而在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎*降解。

L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的，但其在溶液中不稳定，经过一段时间后会降解，确切的降解率一直没有终确定。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。因此GlutaMAX-Ⅰ是细胞培养中谷氨酰胺的替代品。

20.可否使用与原先培养条件不同的培养基？

不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同的培养基，细胞大多无法立即适应，造成细胞无法存活。