RIPA裂解液（强）说明书

RIPA Lysis Buffer

目录号：K2333

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组分说明

                            Cat. No.         K2333

                             Volume        100 ml

 本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途产品简介

　　RIPA裂解液是一种传统的组织以及细胞快速裂解液，主要用于从动物组织和哺乳

动物细胞中抽取可溶性蛋白，可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。按照其裂解液的强度

可以分为强、中、弱三类，具体特点和差异请参考附表2，可根据实验需求选择相应产

品。RIPA裂解液（强）可以有效提取细胞核、细胞膜和胞浆蛋白，提取的蛋白可应用

于蛋白定量、Western Blot、IP等检测分析。

　　RIPA裂解液（强）的主要成分为50mM Tris（pH 7.4），150mM NaCl，1%Triton

X-100，1%  sodium  deoxycholate，0.1%  SDS以及sodium  orthovanadate，sodium

fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可有效抑制蛋白降解。

注意事项

1．为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行。

2．使用RIPA裂解液得到的蛋白样品，可采用BCA法进行蛋白定量，以测定蛋白浓度。

   产品可单独向本公司订购，如：K0014  BCA蛋白定量试剂盒。本品含有高浓度的

   去垢剂，不能用Bradford法进行蛋白定量。

3．建议在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，以防止蛋

   白降解，或保持蛋白的磷酸化状态。产品可单独向本公司订购，如：K2200 蛋白酶抑制剂混合物，K2383 磷酸酶抑制剂混合物。

4．若需获得更高浓度的蛋白，应减少哺乳动物蛋白抽提试剂的使用量。

5．对于培养瓶中的贴壁细胞，推荐先使用常规方法消化细胞，再参考悬浮细胞蛋白提

   取步骤操作。

6．对于离心获得的细胞，若不确定细胞体积，可根据细胞数量计算RIPA裂解液的使用

   量。如5×10⁶个Hela细胞约需加入500 μl RIPA裂解液，以此类推。

操作步骤

  I  细胞样品

 · 贴壁细胞蛋白抽提

1．小心倾去贴壁细胞的培养液。

2．可选步骤：若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质，请先使用预冷的

   PBS漂洗细胞。

3．加入适量RIPA裂解液（使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂），试剂使用量请参考

   附表1，在冰上用枪头吹打贴壁细胞。

表 1   贴壁细胞RIPA 裂解液使用量推荐表

细胞培养板类型或培养面积                         RIPA  裂解液使用量

                     100 mm*                         500-1,000 µl

                      60 mm                          250-500 µl

                    6 孔培养板                          200-400 µl /孔

                   24 孔培养板                          100-200 µl /孔

                   96 孔培养板                          50-100 µl /孔

 * 对于100 mm培养板培养的107个细胞 (50 mg)可裂解获得约3 mg总蛋白（细胞类型不同略有差异）。

4．将裂解液转移至新的离心管中，冰上孵育20分钟，使细胞充分裂解。

5．14,000×g离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。

 · 悬浮细胞蛋白提取

1．悬浮细胞2,500×g，离心5分钟，弃去上清。

2．可选步骤：若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质，请使用PBS漂洗

   细胞。漂洗后的细胞悬浮液2,500×g离心5分钟，弃去上清。

3．加入适量RIPA裂解液（使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂），每5×106细胞加入约

   200-500 µl RIPA裂解液，吹打均匀。

4．冰上放置20分钟，使细胞充分裂解。

5．14,000×g离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。

  II  组织样品

1．取适当的RIPA裂解液，在使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂。

2．称量实验组织的重量，按照1：10（g/ml）的比例加入RIPA裂解液后将组织剪成细

   小碎片，用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少组织蛋白

   抽提试剂使用量。

3．冰上孵育20分钟，使细胞充分裂解。

4．14,000×g 离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。

  注：RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为基因组。

 相关产品信息

            目录号                 产品名称

            K2333              RIPA裂解液（强）

            K2334              RIPA裂解液（中）

            K2335              RIPA裂解液（弱）

            K2336              RIPA裂解液（强中弱套装）

            K2337              SDS裂解液

            K0002/K0889       哺乳动物蛋白抽提试剂/哺乳动物蛋白抽提试剂盒

            K0004/K0891       组织蛋白抽提试剂/组织蛋白抽提试剂盒

            K0199B             Nc-细胞核/浆蛋白抽提试剂盒

            K2200              蛋白酶抑制剂混合物

            K2383              蛋白磷酸酶抑制剂混合物

            K0014              BCA蛋白定量试剂盒

            K0022              SDS-PAGE凝胶制备试剂盒

            K0023              ProteinShow-G250蛋白快速染色试剂

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