微量BCA蛋白定量试剂盒说明书

MicroBCAProteinAssayKit                                                            

微量BCA蛋白定量试剂盒

Cat.No.  K2011                       

保存：BSA 标准品：2-8℃

      其 它 组

分：室温

组分说明

Catalogno.                  K2011

Volume                      120ml

MicroBCAReagentA （MA）               120ml

MicroBCAReagentB （MB）               120ml

MicroBCAReagentC （MC）                6ml

BSA （2mg/ml）                             2ml

产品简介

      BCA 蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。本产品是基于 BCA（BicinchoninicAcid）法研制而成，实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与 Cu²⁺络合生成络合物，同时将 Cu ²⁺ 还原成 Cu ⁺BCA 试剂可敏感特异地与Cu⁺结合，形成稳定的有颜色的复合物。在562nm 处有高的光吸收值，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量。本试剂盒专为低蛋白浓度样品的蛋白定量而设计，可精*&确测定浓度为 2.5-200 μg/ml 的蛋白溶液，试剂盒的灵敏性高，平行性好，不同种蛋白之间的测量差异极低。本试剂同多种非离子型去污剂有较好的相容性。

注意事项 

 1.  BSA 标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致（可用 1×PBS 或 0.9%生理盐水进行稀释）。

2.  操作中请佩戴手套。

3.  本产品仅限科研使用。

操作步骤

 1.  稀释 BSA 标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释 BSA 标准品。

 

管号     稀释液用量（μl）   标准品用量（μl）   终浓度（μg/ml）

 

A               360                40                200

B               400         100（从A管中取）            40

C               250         250（从B管中取）            20

                                                      （从  管中取）

D               250         250    C                   10

E               250         250（从D管中取）              5

 

F               250         250（从E管中取）              2.5

 

G               250                0                0(空白)

 

 2.  配制 MicroBCA 测试工作液：根据标准品和样品的数量配制测试液。

试剂 MD 配制：4volumeMC+100volumeMB

测试工作液 WR 配制： 1volumeMA+1volumeMD

充分混匀后待用

 3.  试管及微板检测（蛋白浓度检测范围：2.5-200 μg/ml）

    1）按上表准备好标准品及待测样品。

    2）将蛋白样品和测试工作液 WR 按照 1:1（体积比）比例加入，充分混匀。在 60 度孵育 60 分钟。

    3）孵育完成后冷却到室温，在 562nm 处读取吸光度值。

    4）标准品与待测样品的吸光度值要扣除空白对照的吸光度值，然后进行浓度的计算。

    5）如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。

 

附表

                             附表 1. 干扰物质表

                                                        

化合物              耐受浓度               化合物              耐受浓度

                  缓冲液                             去垢剂和变性剂

乙酸盐                0.2M              Brij35             1%

甘氨酸                 1M              CHAPS               1%

HEPES              0.1M             盐酸胍                 4M

MES              50mM              NP-40               1%

MOPS              50mM              辛葡糖                 1%

Na+-柠檬酸             ＜1mM               SDS                1%

PIPES             50mM            Triton X-100          1%

磷酸钠                0.1M                       糖类

乙酸钠             0.2M pH 5.5         葡萄糖               10mM

TES              50mM               蔗糖                 1M

Tris             0.1M                      螯合剂

盐类                         EDTA             10mM

                                                                       还原剂

硫酸铵                干扰

NaCl               1M            β-巯基乙醇               50μM

尿素                 3M               DTT               1mM

极性化合物                                  其他

DMSO                5%               脂类                干扰

甘油                10%            HCl/NaOH             0.1M

实验代做服务：