使用目的：

本试剂盒用于测定人血清样本中结核特异性外膜抗体表达。

实验原理

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人结核特异性外膜抗体表达。用纯化的抗原包被微孔

板，制成固相抗原，可与样品中结核特异性外膜抗体相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其

他成分后再与HRP 标记的抗原结合，形成抗原-抗体-抗原复合物，经过*洗涤后加底物

TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用

酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF 值相比较，从而判定标本中人结

核特异性外膜抗体的存在与否。

试剂盒组成

1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶

2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 阳性对照 0.5ml×1 瓶

3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 阴性对照 0.5ml×1 瓶

4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份

5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张

6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2 孔、阳性对照2 孔、空白对照1

孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先

加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不

触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此

重复5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止

液后15 分钟以内进行。

操作程序总结：

计算和结果判定：

试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10

临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

阴性判定：样品OD 值< 临界值（CUT OFF）者为类结核特异性外膜抗体阴性

阳性判定：样品OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为类结核特异性外膜抗体阳性

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