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出血性大肠杆菌O157:H7检测试剂盒说明书

时间:2019-07-22      阅读:1535

出血性大肠杆菌O157:H7检测试剂盒说明书

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(一)生化管的使用方法

    本安瓿瓶已在凹颈处有割口,请以瓶子上的蓝点为受力点,用手以柔力掰开(注意:如安瓿瓶上没有蓝点的,则用砂轮在安瓿瓶的凹颈处划痕,然后再掰开)!本鉴定盒配套的塑料帽已灭菌。所有的安瓿瓶、吸塑架、塑料帽在使用后均高压灭菌后方可弃去。

(二)出血性大肠杆菌O157:H7生化鉴定盒的详细使用方法

    出血性大肠杆菌O157:H7为革兰氏阴性杆菌,需氧或兼性,有周鞭毛,并有菌毛,不产生芽孢的杆菌。发酵乳糖,不发酵或迟缓发酵山梨醇。氧化酶阴性。MUG阴性。从分离培养平板上挑取可疑菌苔接种于每种微量生化管内。将已接种的生化管套上无菌塑料帽,直立于三折吸塑短架内,于35-37℃培养箱中培养,结果观察见表1。注意:如有特殊的接种方式或培养时间,请详见每种生化管附带的使用说明。

表1

产品名称

结果判定

培养时间

(小时)

使用说明

阳性

阴性

山梨醇

黄色

紫色

8-24

 

纤维二糖

棉子糖

蛋白胨水

红色

不变色

24

培养后加靛基质试剂2-3滴,立即观察结果。

西蒙氏枸橼酸盐

蓝色

不变色

24-48

用接种针挑取新鲜菌苔在斜面上划“之”字形接种,竖立培育。

鸟、赖氨酸脱羧酶

试验管蓝绿色,

对照管变黄

试验管与对照管均变黄

18-24

每株被检菌应同时接种氨基酸对照管一支,并加灭菌液体石蜡5-8滴覆盖培养基表面。培养18-24小时,未见阳性结果,继续培养4天,再做终结果判定。

半固体琼脂

扩散生长

无扩散生长

24—48

用接种针挑取新鲜菌苔穿刺接种,竖立培育。

三糖铁琼脂

产酸变黄色,

产硫化氢变黑色

不变色

24

用接种针挑取新鲜菌苔穿刺,穿刺完毕后在斜面上划“之”字形接种,竖立培育。

葡萄糖磷酸盐胨水

MR:     红色

不变色

96

培养后加MR试剂2-3滴,立即观察结果。

VP:     红色

不变色

48

培养后依次加入8滴VP试剂甲液及4滴乙液,混匀,再培养10-20分钟观察结果。

试验项目

结果判定

山梨醇

阴性或迟缓

纤维二糖

阴性

棉子糖

阳性

蛋白胨水

阳性

西蒙氏枸橼酸盐

阴性

鸟氨酸脱羧酶

阳性

赖氨酸脱羧酶

阳性

半固体琼脂

有动力或无动力

三糖铁琼脂

底及斜面呈黄色H2S阴性

葡萄糖磷酸盐胨水

MR 阳性   VP 阴性

备注:本鉴定盒是按照产品目录中的品种成份从左到右的顺序摆放。

 

(三)出血性大肠杆菌O157:H7的和生化鉴定特征(见表2)

表2  大肠杆菌O157:H7的生化特征

试验项目

结果判定

山梨醇

阴性或迟缓

纤维二糖

阴性

棉子糖

阳性

蛋白胨水

阳性

西蒙氏枸橼酸盐

阴性

鸟氨酸脱羧酶

阳性

赖氨酸脱羧酶

阳性

半固体琼脂

有动力或无动力

三糖铁琼脂

底及斜面呈黄色H2S阴性

葡萄糖磷酸盐胨水

MR 阳性   VP 阴性

注:“+”  阳性; “—” 阴性        ;“+/-” 阳性或阴性 

凡用于上述方法在被检食品中分离获得的纯菌落,经用抗E.coli O157:H7标准血清或EHEC O157:H7。乳胶凝集试剂测试,呈阳性结果即可报告为该食品试样中检出肠出血性大肠杆菌O157:H7。

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