暗视野显微镜又被称作暗场显微镜，是一种通过观察样品受侧向光照射时所产生的散射光来分辨样品细节的显微镜。 暗视野显微镜适用于检查未染色标本的形态及其运动能力。

原理和结构特点：

暗视野显微镜和普通的明视野显微镜区别在于它们的聚光器有所不同。暗视野显微镜装有一个*遮暗的聚光器，使光线不能通过聚光器，而只能从聚光器四周及未遮暗的部位斜射到载玻片的标本上。同时因光线是斜射的，不能进入物镜，而使得观察的视野也是暗的，而聚光器斜射到菌体上的光线，则因光的散射作用而使菌体发亮，再反射至物镜内，这样在显微镜中则可见到暗视野中明亮的影像。

操作方法：

1）使用研究级暗视野显微镜，或将普通光学显微镜上的聚光器取下来，装上暗场聚光器；

2）不论使用的是干燥物镜还是油浸物镜，在进行镜检时都应在聚光器的上透镜上，加上一滴香柏油；

3）将制作好的细菌悬滴标本片放置于载物台上，然后上升聚光器至顶部，使油与载玻片相接触；

4）放大光源；

5）进行聚光器光轴调节及调焦；首先用10×物镜找到被检物像，然后调小聚光器虹彩光圈，直至可在视野中看到视场光阑的轮廓，再上下细致调整聚光器，这样会使视场光阑的影像变得更为清晰，同时，如视场光阑不在场*，则可利用聚光器外侧的两个调节钮进行调整，当亮光点到达场*后，再将其调大，方可进行观察。

注意事项：

1）暗视野观察所用物镜的数值孔径一般适宜在1.00—1.25左右，建议使用带视场光阑的物镜，通过随意转动物镜中部的调节环，可轻松改变数值孔径的大小。

2）更要求使用的载玻片和盖玻片必须无划痕、无灰尘，且物镜前透镜也必须洁净无尘。同时载玻片与盖玻片的厚度也应符合标准。

3）镜检时室内的光线应较暗，如果达不到这样的条件，也应尽量使用遮光装置，以更好的阻止目镜周围有光线射入。

4）在进行油镜的镜检时，由于油内的杂质和气泡产生的漫反射，可能会影响视场的镜检效果，所以必须尽量先清除掉油内的杂质和气泡等。

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