韩国科学家Mohammad Nazrul Islam等先前开发了一步测序和无连接酶克隆（SLIC）的方法，它简单、快速并且成本低。尽管SLIC方法通常作用效果很好，但是有时候它的克隆效率很低，可能是由于T4 DNA聚合酶室温处理2.5min时导致单链DNA区域形成稳定的二级结构。为了克服这个问题，通过检测较短T4 DNA聚合酶在很宽温度范围内（25℃-75℃）的持续处理时间（5s-2.5min），韩国科学家Mohammad Nazrul Islam等开发了一种改进的热调节SLIC方法。当插入的同源片段小于20bp，然后用T4 DNA聚合酶在50度处理30s，这样的克隆效率zui高。较高的温度下，这种较短的T4聚合酶帮助增加其两端插入强二级结构的DNA的克隆效率，增加短片段克隆的SLIC的效率。

原文：

Optimizing T4 DNA polymerase conditions enhances the efficiency of one-step sequence- and ligation-independent cloning. Mohammad Nazrul Islam, Kyeong Won Lee, Hyung-SoonYim et al. BioTechniques 63:125-130 (September 2017).