噬菌体试验的基本方法
时间:2024-08-12 阅读:397
(一)噬菌体的分离和纯化
1 . 噬菌体的分离
每份未处理的污水样品取100mL,混合后,经36±1℃培养14~24h,通过孔径为0.45mm的薄膜滤器,检查滤液中是否有噬菌体的存在。用斑点试验法检查噬菌体。
2 . 单斑纯化
根据斑点试验法的结果,估计滤液内噬菌体的数量。将滤液按百倍稀释法作两次连续稀释。即吸取0.02mL,稀释在2mL肉汤内,使成10-2;再吸取此稀释液0.02mL,稀释在2mL肉汤内,使成10-4。
(二)PFU和RTD
PFU和RTD是噬菌体效价的计量单位。PFU是噬斑形成单位,表示有感染能力的噬菌体数量,以每毫升内的PFU表示(PFU/ml)。RTD是常规试验稀释度,一般以平板上滴加噬菌体的部位刚刚能够出现或刚刚不能出现完-全融合性裂解(CL)所需要的噬菌体稀释度。
(三)噬菌体的制备
繁殖菌:制备噬菌体用的宿主菌称为繁殖菌,噬菌体的繁殖菌应予以冻干保存。
噬菌体种: 制备用的噬菌体种应经三次纯化后保存,种子管先作PFU测定。
(四)裂解谱和裂解模式
裂解谱是指一种噬菌体的作用范围。裂解谱的测定是为了确定该噬菌体在种内或属内的广谱性,在种外或属外的交叉反应性。
裂解模式是指几种噬菌体组成为配套,各种细菌培养物被几种噬菌体作用而出现的特殊的反应模式,不同的细菌,可呈现不同的反应模式。
裂解谱和裂解模式应使用达到规定效价的噬菌体进行测定。肠杆菌科诊断用噬菌体一般用原液进行试验,效价要求在103~105RTD或109~1011PFU/ml之间。分型试验一般用1 RTD的噬菌体。
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