恒远生物|大鼠胚胎心肌细胞H9c2(2-1)培养攻略
时间：2024-03-12 阅读：722
品牌: 恒远生物
货号: HYCC30031
中文名称: 大鼠胚胎心肌细胞
规格: T25
形态特性: 上皮样细胞生长
生长特性: 贴壁生长
培养条件:DMEM+10%FBS
传代方法: 1:2~1:6传代；2~3天换液1次。
冻存条件: 无血清细胞冻存液
特征特性：该细胞由Kimes B和Brandt B从BD1X大鼠胚胎心脏组织的克隆细胞株亚克隆得到；表现出许多骨骼肌的特性。这个细胞株中的成肌细胞能融合形成多核的肌管，并对乙酰胆碱的刺激发生反应。如果培养基中的血清浓度下降到1%，融合很快发生。
一、细胞收到后处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满培养液并封好瓶口是细胞运输的常见办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的培养液收集至离心管中，加入6ml培养基，放入37℃、孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，处理完后放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶里面的培养基，另外一瓶用自己配的培养基），若是5%CO2的培养箱，可用密封培养瓶，拧紧瓶盖后放入5%CO2培养箱，48H内要换液一次。
二、细胞培养步骤
1.培养皿/瓶用枪头或移液管吸去原培养液。
2.无菌PBS或无菌生理盐水洗涤3次（按培养体积加入）。
3.加入适量胰酶消化适当时间（一般胰酶为0.25%；9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶，一次加入1mL胰酶。消化时间视细胞类型等多种情况综合考虑，一般如果是细胞株，非原代培养，消化1－2分钟足矣）。
4.用枪头吹打数十次（视细胞类型而定。一般细胞株30－50次吧，耗时一般2分钟左右）。
5. 加入适量体积培养基终止胰酶消化（如果是9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶，可以加入1mL培养基；现在培养瓶（皿）里有2mL溶液）。
6.现在可以将溶液进行分瓶（2mL）。如果是细胞株，直接均分到两个培养瓶（皿）里。如果是原代培养，可以根据消化时间来对细胞进行分离；因此可以将溶液（2mL）都转入新的培养瓶（皿）。
7.将两个培养瓶（皿）补足培养基到正常体积（果是9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶，为5mL培养液）。
8.镜下观察。刚刚传代细胞还没贴壁，悬浮在溶液中，呈圆形。一般2h之内会贴壁，如果已经贴壁，根据细胞类型有不同的形态，但通常都不是圆形。
9.镜下观察无误之后，再放入细胞培养箱。培养瓶（皿）放入之前，可以用消毒酒精先擦一下。
10.传代之后，最好第二天细胞换液一次。当然，也可以视情况而定。
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