PCR实验中常见问题解决方法
时间：2023-06-20 阅读：693
PCR实验中常见问题及解决方案
| PCR实验中常见问题汇总 | ||
| 问题及现象 | 原因 | 解决方案 |
| 1. PCR 后，管中的液体较少。 | 样品挥发，损失 | 确保加热的盖子达到适当的温度。 |
| 吸取样本后，尽快盖上PCR 管的盖子。防止挥发。 | ||
| 移液不准确 | 确保吸取 20 µL 引物混合物和 5 µl Lambda DNA 模板到 PCR 管中。样本量少时需要采用高精度移液器。 | |
| 2.在 QuickStrip 中没有足够的样本 | QuikStrip 已变干。 | 加入 40 μL 水，在装载前轻轻上下移液以混合均匀。 |
| 3.电泳凝胶上看不到条带、对照 DNA 和PCR 产物 | 凝胶未正确制备。 | 确保正确稀释电泳缓冲液。 |
| 融化琼脂糖时需要特别注意较高浓度 (>0.8%) 的凝胶。在倒入凝胶之前，确保溶液 没有“团块 ”和玻璃状颗粒，也可以直接使用配置好的预制胶。省时省力。 | ||
| 凝胶未正确染色。 | 染色时注意浓度，实在不行就重新染色。 | |
| 电泳装置或电源出现故障。 | 请联系电泳仪或电泳设备供应商，帮忙排除故障 | |
| 4.凝胶染色后，DNA 条带模糊。 | 凝胶没有染色足够长的时间。 | 严格按照染色流程说明进行实验操作。 |
| 5.染色后，条带可见，但不存在 PCR 产物。 | PCR扩增不成功。 | 注意引物设计是否合理，DNA聚合酶的加入量是否适宜。 |
| 确保PCR的正确操作，温度设计是否合理。 | ||
| 6.染色后，凝胶上可见条带和对照 PCR 产物，其中一部分样品不存在。 | PCR 反应中添加了错误体积的 DNA 和引物。 | 熟练使用移液器进行精准移液定量，确保移液的准确度 |