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细胞实验验证基因功能

时间:2023-06-21      阅读:646

一、实验材料: 疾病对应的细胞系(或者是原代细胞),预算充足情况下可以选择2种细胞系,暂定为:A和B细胞
二、实验方案:敲低两种细胞的目的基因1、过表达两种细胞的目的基因1(若是miRNA可以使用mimics、inhibitor)
三、干扰片段筛选2种细胞都需要筛选(当用mimics和inhibitor时也需要初步筛选表达效果)
目的基因1干扰片段筛选:针对目的基因1设计并合成3条siRNA及NC,转染细胞,QPCR筛选出干扰 的片段进行后续实验; 
四、实验分组:A或B细胞

  • A

  • A+siRNA NC对照组

  • A+siRNA目的基因1干扰

  • A+过表达目标基因1 

  • A+过表达空载

  • 抑制剂处理浓度1

五、检测项目:

  • 细胞增殖或者细胞毒性检测(CCK法/MMT),

  • 流式检测细胞周期,

  • 流式检测细胞凋亡,

  • 细胞侵袭实验(transwell),迁移、划痕

  • WB检测细胞信号通路中蛋白的表达变化,

  • QPCR检测信号通路中基因的表达, 

  • 免疫荧光检测下游信号通路蛋白

  • 流式多色检测某些marker指标

  • Coip检测A和B蛋白是否结合

  • 双荧光素酶检测A和B是否结合

  • 油红O染色

  • 生化检测:SOD,CAT等

  • 透射电镜

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