选购国产PCR仪时需要考虑的因素
时间:2023-08-06 阅读:462
PCR仪作为分子生物学相关实验的常规仪器,每年都有数千台的选购量,这两年一批国产PCR仪正在兴起。购买国产PCR仪需要考虑以下因素:
1、样本管的种类
现在主要有0.2ml和0.5ml两种,使用0.5ml PCR管的人员已经很少了,一是0.5ml PCR专用的薄壁管很少见,二是如果想要较大体积的PCR产物,可以通过多分几个0.2ml PCR管来实现。除非经常需要较大体积的PCR产物,否则可以不必考虑0.5ml型的PCR仪。
2、样本容量
种类很多,0.2ml的有96孔和48孔,0.5ml的有60孔和30孔,384孔等,当然还有一些其他组合:如0.2ml的48孔与0.5ml的30孔组合。购买96孔的还是48孔的PCR仪主要从经济上考虑,当然现在很多的厂家都有双48孔的产品,可以当两台48孔的PCR仪使用,也是一个比较好的选择,但48孔的PCR仪大都没有梯度功能。
一般来讲384孔都是用384孔的,对封膜的要求比较高,一定要采用专门用于PCR反应的膜,普通封板膜会影响PCR反应,造成实验失败。还有一些特别的PCR仪,如用于原位PCR的。
3、温度梯度功能
即不同列或不同行之间温度可以为不同的温度。这一功能对于固定PCR程序的检验人员来讲,可能用处不大,但对于经常进行不同基因扩增的研究人员来讲可以说是必须的。因为大家都知道PCR反应的复性温度是PCR成功的要素,PCR复性温度只有通过温度梯度实验来选择才是适宜的,你可以通过温度梯度实验了解到实验成功的复性温度范围,选择中间的一个温度点来保证实验的可重复性。朗基T20、T30 PCR仪就属于这一类。
通过理论计算得到的复性温度可以作为温度梯度实验的中心点来使用,如果认为这一温度就是好的复性温度则是错误的。因为复性的温度与缓冲液中的离子强度、DMSO的含量、Mg2+离子的浓度等都有直接关系,而研究人员一般并不了解所用的缓冲液中这些因素的含量或是在计算时都采用了缺省值。
另外,假设理论计算是正确的,但PCR仪的温度还有准确性和精确性的问题,一般都在±0.3至±0.5,也会影响到实验的重复性,通过实验来确定复性温度可以解决仪器准确性问题。这也是有些实验在一台仪器上做得很好,换一台仪器就不好的一个原因。当然温度梯度功能也可用于变性温度等的优化。