多功能酶标仪灵敏度影响因素探究
时间:2023-08-09 阅读:403
现在,多功能酶标仪基本上是每个生物学实验室的基础科研设备。市场上多功能酶标仪品牌主要有Bio-Tek、BMG、MD、PE、Tecan等。每个品牌都有自己的特色和优势产品。而各品牌厂家在对自己产品性能-比如说检测灵敏度的描述时,除了表征光吸收值的OD值参数外,像荧光检测灵敏度、发光检测灵敏度等,却往往没有一个统一的方式和定义(名称等)。这对用户在选购酶标仪时进行仪器间性能的对比会带来一定的困惑。我们来看看市场上的优势品牌在对荧光检测灵敏度这一参数的不同的描述: |
,对于灵敏度的描述,主要有“Sensitivity”和“Detection Limit”两种说法,我们分别来看它们的定义: |
1.分析方法的检出限:国际理论与应用化学联合会(IUPAC)对检出限的规定:对各种光学分析方法,可测量的最小分析信号XL以下式表示:
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2.仪器检出限:用于评价仪器的检测能量,即:相对应背景,仪器可靠检测的最小信号,通常用信噪比S/N来表示,为S/N≥K,根据置信度概念,K可取2或3,为合理的赋予值。 B: Sensitivity:灵敏度。对于灵敏度概念而言,在IUPAC的定义是:方法的灵敏度m表示被测组分浓度或含量改变一个单位时所引起的分析信号的变化,即m=dX/dc。其中X为分析信号,c为浓度或含量。在分析方法的校正曲线上,一般可以认为灵敏度就是分析校正曲线的斜率。曲线斜率越大,表示灵敏度越高。但在仪器参数中所说的“Sensitivity”并不是表示这一概念,而是具体指的是“DL(Detection Limit)或LOD(Limit Of Detection)”,比如BMG在Sensitivity的注解中就明确说明指的是“LOD”。如果上述(表中)参数描述的“Detection Limit”(Tecan/MD/PE)指的是“方法检出限”且“Sensitivity”(BMG/Bio-Tek/Thermo)指的是“LOD”时,则Sensitivity=LOD=DL=Detection Limit。虽然描述词不同,但是概念是相同的,其参数可以直接比较。 |
目前从各厂家公开的资料中,只有BMG明确说明采用国际理论与应用化学联合会(IUPAC)的检测标准去例明参数。也只有BMG公司在参数中明确写明了其Sensitivity的定义,包括定义、详细的测定条件等。例如在BMG最新推迟的高性能渐变滤片型光栅多功能酶标仪CLARIOstar的参数描述中,其FI(荧光)顶读的灵敏度为FI Filters (top) < 0.4 pM (< 8 amol/well Fluorescein, 384sv, 20 μL),就在参数后面明确写明了测试灵敏度时的方法:采用荧光素(Fluorescein)为底物做6点的标准曲线,采用的是384 Small Volume微孔板,20μL的检测体系。这里要清楚知道,测定参数时采用的微孔板类型以及检测体系的体积非常重要。因为不同的条件,其灵敏度计算结果是不一样的。下面表2为各酶标仪厂家的网站的参数资料: |
每个厂家都有不同的标准去定出其检测灵敏度。一般会把所用的检测浓度和质量写出来,但也有些厂家或型号只例出浓度单位,例如:Bio-Tek Neo,MD SpectraMax M5/M3等。要全面比较检测灵敏度,其实要配合浓度、质量和检测体积几个要数作考虑。如果只有浓度(M),那实际检测的体积是多少?200μl?100μl或是20μl?不同的体积会使实际检测的质量不同,这可以是十倍或更多的差别。 综合以上各方面,在对酶标仪的参数进行对比时,单位的统一非常重要,同时测定参数时采用的条件同样重要。对于众多厂家的仪器,其实很难用一个 一样的方法去比较,因为不同厂家所用的条件都不一样。毕竟仪器的性能和表现是要用家使用出来,而不只是靠把参数写得漂亮。 |