说说高质量培养基的实验操作步骤
时间:2020-11-25 阅读:368
高质量培养基是用于人类多能干细胞的培养基,它没有外来动物成分,化学成分清晰,并且适合无滋养细胞培养。该产品适用于系统中培养的干细胞,可用于干细胞传代。它含有防止细胞凋亡和分化的干细胞保护因子,并对细胞具有良好的保护作用。
1、不需要滋养细胞。
2、成分清晰,批次之间的差异很小。
3、适用于在Essential8系统中培养的人多能干细胞。
4、不含外来动物成分,大大降低了各种病毒,霉菌和支原体污染的风险。
高质量培养基实验操作步骤:
1、基质胶包被的培养板:取出6孔板/12孔板,并加入1mL/0.5mL即用型基质胶(AC-1001007)移至每个孔,轻轻摇动6孔板/12孔板,使Matrigel*覆盖培养皿的底部。将其置于37℃的恒温箱中,保温1h〜2h。实验前将其取出,并放在干净的工作台/生物安全柜中以在室温下平衡。20分钟如果暂时不使用,可以用Parafilm密封并在2-8°C下保存并在1周内使用。
注意:①冷冻的干细胞数量约为1×106细胞/mL,相当于6孔板中的1个孔;②即用型基质胶对温度敏感,因此请在使用后立即拿走,并在使用后立即放回原处。储存在4°C的冰箱中,不要接触Matrigel液面的瓶体直接接触,将影响基质胶的质量。
2、首先将2〜3mL干细胞培养基添加到15mL离心管中,以备后用。
3、解冻:将从液氮中取出的冷冻保存管快速浸入37℃的温水中,并迅速摇动使其在1〜2min内解冻;注意:应迅速从液氮中取出电池,以尽量减少其暴露于室温的时间。
4、离心:将冻存管中的冻存溶液解冻后,滴加到装有干细胞培养基的15mL离心管中。将15mL离心管放入低速离心机中,然后以1200rpm离心。3分钟;
5、重悬:离心后,弃去上清液,加入1mL人多能干细胞培养基移液,吸干细胞沉淀约3至5次。
6、接种:均匀吹吸后,丢弃已平衡的即用型基质胶,将均匀吹干的干细胞悬液加入包被的6孔板中,并在每个孔中填充2mL训练系统。
7、高质量培养基培养:可将接种的6孔板置于倒置相差显微镜下,观察接种的干细胞的密度和细胞团的大小。超过4个细胞的团块更合格。水平的十字架很轻。摇动6孔板/12孔板以均匀分布细胞。在37°C和5%CO2的恒温培养箱中孵育。第二天观察细胞的粘附;
8、更换培养基:从复苏开始每隔24小时更换一次培养基。