微生物无菌检测操作规程如下：

　　

　　1、无菌室应配备无菌操作间和缓冲间。无菌操作间洁净度达到10000级。室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台的洁净度应达到100级。

　　

　　2、无菌室应保持清洁，严禁杂物，防止污染。

　　

　　3、严格防止所有灭菌设备和培养基受到污染，被污染者应停止使用。

　　

　　4、无菌室应配备工作浓度的消毒剂，如5%甲酚溶液、70%酒精、0.1%溴洁尔敏溶液等。

　　

　　5、无菌室应定期用适当的消毒剂进行消毒清洁，确保无菌室的洁净度符合要求。

　　

　　6、所有需要带入无菌室的仪器、器具、盘子等物品，应包扎严实，并采用适当的方法进行灭菌。

　　

　　7、进入无菌室前，工作人员必须用肥皂或消毒液洗手，然后在缓冲间更换专用工作服、鞋帽、口罩和手套（或用70%乙醇再次擦手）。

　　

　　8、使用无菌室前，必须打开无菌室紫外线灯照射灭菌30分钟以上，同时打开超净台进行吹气。手术后应及时清理无菌室，并用紫外线灯消毒20分钟。

　　

　　9、微生物无菌检测前，试品外包装应保持完好，不得打开，以防污染。检查前，用70%酒精棉球对外表面进行消毒。

　　

　　10、每次操作时应做阴性对照，检查无菌操作的可靠性。

　　

　　11、吸菌液时，必须用耳球吸。不要用嘴直接接触吸管。

　　

　　12、微生物无菌检测前后，接种针必须进行火焰燃烧消毒，待培养物冷却后才能接种。

　　

　　13、吸管、试管、培养皿等带有菌液的器皿，用含5%来苏尔溶液的消毒桶浸泡消毒，24小时后取出清洗。若菌液洒在桌面或地面上，应立即用5%石炭酸溶液或3%来苏尔溶液将其倾倒在污染处至少30分钟后再进行处理。工作服、帽子被菌液污染时，应立即脱下，高压蒸汽灭菌后清洗。

　　

　　15、所有带有活菌的物品必须经过消毒后才能在水龙头下清洗。严禁污染下水道。每个月应在无菌室检查菌落数。打开超净工作台后，取数个内径为90mm的无菌培养皿，注入约15ml溶化并冷却至约45℃无菌操作的营养琼脂培养基，放入30～35℃培养箱中48凝固后数小时，取3～5块板分别放在工作位置的左、中、右。开盖暴露30分钟后，放入30～35℃培养箱中48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌平均数不得超过1个菌落，10000级洁净室平均菌数不得超过3个菌落。超过限值时，对无菌室进行*消毒，直至重复检查符合要求。