化学发光试剂使用方法：  

1.印迹膜制备按常规方法完成SDS-PAGE和电转膜操作，适当的封闭非常重要。可以通过标记一抗或二抗的手段引入HRP，一般采用市售的HRP二抗交联物。仔细地淋洗对于降低背景非常重要，在与HRP交联物温育后，膜片更需仔细洗涤，所有步骤均在室温下完成。  

2.化学发光试剂的配置在使用前等量混合A液和B液，混合后尽快使用。将膜片置混合液中于室温下振荡温育2分钟，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆盖全膜片。  

3.蛋白信号显现  

1).用平头镊钳住膜片，垂直置于吸水纸以吸去过量试剂。  

2).置膜片于二层保鲜膜之间，小心赶尽气泡。  

3).将膜片吸附蛋白面朝上，置于X光片盒中。  

4).于暗室中压上X光片。  

5).根据信号的强弱适当调整曝光时间，一般为1min或5min，也可选择不同时间多次压片，以达*效果。显影冲洗。  

6).调节曝光时间，再次曝光显影。