Bridge-It® L-蛋氨酸 (L-Met) 荧光检测试剂盒说明书
时间:2022-07-20 阅读:641
mediomics Bridge-It® L-蛋氨酸 (L-Met) 荧光检测试剂盒说明书
Bridge-It® L-蛋氨酸 (L-Met) 荧光检测试剂盒,384 孔格式
货号:1-1-1006
类别:384 孔板,Bridge-It 检测,DNA 甲基化,细胞内信号,L-蛋氨酸。
标签:384 孔,Bridge-It,L-Met,L-蛋氨酸。
描述
Bridge-It® L-蛋氨酸 (L-Met) 荧光检测试剂盒,384 孔格式
应用:
直接测量样品中的 L-Met 水平
使用 Met 作为底物或 Met 作为产物的酶(即蛋氨酸氨基肽酶)的测定
特征:
简单: 将测试样品或标准品与检测溶液混合并孵育
快速: 孵育 50 分钟后读取荧光信号
敏感: 检测 L-蛋氨酸的检测下限为 10 µM
灵活: 检测适用于低通量和高通量筛选形式
L-蛋氨酸和 Bridge-It® 荧光检测的背景信息
L-蛋氨酸 (L-Met)
L-蛋氨酸是一种必需氨基酸,必须从食物来源或膳食补充剂中获取。它是其他含硫氨基酸、半胱氨酸、牛磺酸和谷胱甘肽的前体。蛋氨酸与三磷酸腺苷反应形成 S-腺苷蛋氨酸 (SAM),它是体内主要的甲基供体,有助于合成许多重要物质,包括肾上腺素和胆碱。L-蛋氨酸也是动物饲料的重要补充剂。目前,L-蛋氨酸使用高压液相色谱 (HPLC) 方法进行定量。HPLC 耗时、昂贵,并且由于需要大量的有机溶剂,因此对环境不友好。
Bridge-It® L-蛋氨酸荧光 (L-Met) 检测1,2
真核细胞含有大约 3,000 个序列特异性 DNA 结合蛋白。这些重要的蛋白质在有或没有特定的小分子共调节因子(配体)的情况下起作用,控制基因组 DNA 活性的所有方面,包括基因表达、DNA 复制和 DNA 修复。Mediomics 正在应用其新型荧光检测平台开发体外检测,用于快速、灵敏地量化 DNA 结合蛋白及其小分子配体的活性。
Mediomics Bridge-It® L-蛋氨酸荧光检测方法基于成熟的荧光测量技术和新的检测平台设计的结合,利用 DNA 结合蛋白作为其各自小分子辅助调节剂(配体)的生物传感器。DNA 序列特异性 MetJ 蛋氨酸抑制蛋白对其*的 DNA 结合位点的亲和力在其配体 S-腺苷蛋氨酸 (SAM) 的存在下大大增加。对于该测定,MetJ 共有序列被分成两个大致相等的 DNA “半位点”,其中一个片段用荧光素标记,另一半片段用 Oyster® 645 荧光团3,4标记. 测试样品中 SAM 的相对量将影响测定中 DNA-MetJ 蛋白复合物形成的量。当这种复合物形成时,它会将荧光标记的 DNA 半位点靠近并导致荧光信号发射发生可测量的变化(增加),这可以使用酶标仪轻松测量(波长设置:吸收 485 nm;发射 665 nm )。在存在 ATP 和 Mg2+ 的情况下,L-甲硫氨酸很容易被 S-腺苷甲硫氨酸合成酶转化为 SAM。使用 L-蛋氨酸标准曲线确定测试样品中的 L-蛋氨酸浓度。
Bridge-It® L-蛋氨酸荧光检测方法具有非常理想的性能特征,包括高信噪比 (S/B)、良好的线性动态范围和约 10 μM 的检测限。总测定时间为 50 分钟。
注:此标准曲线仅供参考。请生成您自己的标准曲线。
与 HPLC 程序相比,Bridge-It® L-蛋氨酸荧光检测方法采用 384 和 96 孔微孔板形式。因此,它非常适合快速、同时测量大量测试样品中的 L-蛋氨酸水平。此外,这种方法很容易适应目前用于药物发现研究的高通量筛选平台。