TR-FRET Bridge-It® L-蛋氨酸 (L-Met) 荧光检测试剂盒,384 孔格式
应用:
直接测量样品中的 L-Met 水平
使用 Met 作为底物或 Met 作为产物的酶(即蛋氨酸氨基肽酶)的测定
特征:
简单: 将测试样品或标准品与检测溶液混合并孵育。绝对没有洗涤步骤!
快速: 孵育 50 分钟后读取荧光信号
敏感: 检测 L-蛋氨酸的检测下限为 10 µM
灵活: 检测有 FRET 和 TR-FRET 格式,可根据要求调整为比色格式。
特异性:与标准氨基酸或 L-Met 衍生物(L-Met 亚砜和 L-Met 砜)无交叉反应。
L-蛋氨酸和 TR-FRET Bridge-It® 荧光检测的背景信息
L-蛋氨酸 (L-Met)
L-蛋氨酸是一种必需氨基酸,必须从食物来源或膳食补充剂中获取。它是其他硫化合物的前体,包括半胱氨酸、牛磺酸和谷胱甘肽。蛋氨酸与三磷酸腺苷反应形成 S-腺苷蛋氨酸 (SAM),它是体内主要的甲基供体,有助于合成许多重要物质,包括肾上腺素和胆碱。L-蛋氨酸也是动物饲料的重要补充剂。目前,L-蛋氨酸使用高压液相色谱 (HPLC) 方法进行定量。HPLC 耗时、昂贵,并且由于需要大量的有机溶剂,因此对环境不友好。
TR-FRET Bridge-It® L-蛋氨酸荧光 (L-Met) 检测1,2
真核细胞含有大约 3,000 个序列特异性 DNA 结合蛋白。这些重要的蛋白质在有或没有特定的小分子共调节因子(配体)的情况下起作用,控制基因组 DNA 活性的所有方面,包括基因表达、DNA 复制和 DNA 修复。Mediomics 正在应用其新型荧光检测平台开发体外检测,用于快速、灵敏地量化 DNA 结合蛋白及其小分子配体的活性。
所有序列特异性 DNA 结合蛋白的共同特性是它们能够以高亲和力和特异性结合含有*核苷酸序列的 DNA 双链体,即蛋白质的 DNA 结合位点。
Mediomics 的新型检测平台依赖于这一共同特征。包含给定目标 DNA 结合蛋白的序列特异性 DNA 结合位点的 DNA 双链体被分成两个 DNA“半位点”双链体,每个双链体都有一个短的单链突出端。这些单链延伸足够短,因此在没有靶蛋白的情况下几乎不会发生自发的重新结合。然而,当靶蛋白存在时,它对全长 DNA 序列的高亲和力将驱动两个半位点 DNA 双链体的重新结合。这种重新结合可以通过将两个荧光团系统 [一个供体 (Eu3+) 和一个受体] 并入两个 DNA 半位点中的每一个中来灵敏地检测到。在该测定中,DNA 结合蛋白充当其特定配体 (SAM) 的生物传感器。配体与 DNA 结合蛋白结合,通过构象变化激活结合位点。由于两个荧光团之间的时间分辨荧光共振能量转移 (TR-FRET),激活的 DNA 结合蛋白的存在被检测为受体荧光团的荧光信号增加或供体荧光团的荧光信号减少.
Bridge-It® L-蛋氨酸荧光检测方法具有非常理想的性能特征,包括高信背景 (S/B) 比、良好的线性动态范围和约 10 μM 的检测限。总测定时间为 50 分钟。
注: 此标准曲线仅供参考。请生成您自己的标准曲线。
与 HPLC 程序相比,Bridge-It® L-蛋氨酸荧光检测方法采用 384 和 96 孔微孔板形式。因此,它非常适合快速、同时测量大量测试样品中的 L-蛋氨酸水平。此外,这种方法很容易适应目前用于药物发现研究的高通量筛选平台。