SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳低分子量标准蛋白质 宝叶生物
时间：2024-02-19 阅读：1568
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳低分子量标准蛋白质
本公司研制的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳低分子量标准蛋白质，使用方便，效果尤佳。其分子量范围是14400～97400道尔顿。
成分：
成分 | 分子量（道尔顿） | 含量（μg/支） |
兔磷酸化酶B/Rabit phosphorglase B | 97400 | 40 |
牛血清白蛋白/Bovine serum Albumin | 66200 | 40 |
兔肌动蛋白/Rabbit actin | 43000 | 40 |
牛碳酸酐/Bovine carbonic anhydrase | 31000 | 40 |
胰蛋白酶抑制剂/Trypsin inhibitor | 20100 | 40 |
鸡蛋清溶菌酶/Hen egg white lysozyme | 14400 | 40 |
本产品规格：冻干粉（20次/支）
使用方法：
1、 将冻干粉产品先加200ul重蒸水溶解，再加等体积的2倍样品缓冲液混匀。在沸水浴中变性3-5分钟，分装20ul/支，入-20℃保存。使用时取一支即可上样。
2、 应经常规SDS-PAGE电泳后，用考马斯亮蓝R-250或G-250（coomassie blue R-250 or G250）染色。可得分布均匀、密度相同的6个蛋白质条带
3、 银染法：将本品以1倍样品缓冲液稀释40-50倍后分装（8ul/支）、-20℃保存。使用前取一支，100℃水浴3-5分钟即可上样。经常规SDS-PAGE后银染，可得分布均匀的6个蛋白质条带。
建议使用分离胶：14%（T）。
表-2倍样品缓冲液配制：
试剂名称 | 成分 | 含量/浓度 | 配制方法 |
2倍样品 缓冲液 | 0.5M Tris-HCI,PH6.8 | 2.0ml | 以上溶液混合后加双蒸水2.5ml至10.0ml，可适当调整溴酚蓝的用量以保证电泳时的*指示 |
丙三醇（甘油） | 2.0ml | ||
20%SDS | 2.0ml | ||
0.1%（w/v）溴酚蓝 | 0.5ml | ||
2-b-巯基乙醇 | 1.0ml |
Reagents for SDS Gels
A. 4×Lower gel buffer pH8.8
1.5M Tris 90.83g
0.4%（w/v）SDS 2.00g
dd H2O to 500ml
用浓HC1调PH至8.8
B. 4×Upper gel buffer pH6.8
0.5M Tris 12.11g
0.4%（w/v）SDS 0.8g
dd H2O to 200ml
用浓HC1调PH至6.8
C. 30% Acrylamide regular
29.2%（w/v）acrylamide 29.2g
0.8%（w/v）Bis-acrylamide 0.8g
dd H2O to 100ml
加热使acrylamide*溶解，冷却后加Bis混合溶解后定容，用滤纸过滤，装棕色瓶
D. 10×Running buffer
0.25M Tris 30.3g
1.92M Gly 144.1g
1.0%（w/v）SDS 10.0g
dd H2O to 100ml
（无需调PH）PH即为8.2-8.3
分离胶 总体积12ml 单位：ml 浓缩胶
5% | 7% | 10% | 11.5% | 12% | 13.5% | 14% | 15% | 5% | ||
dd H2O | 7 | 6.2 | 5 | 4.4 | 4.2 | 3.6 | 3.4 | 3 | dd H2O | 4.06 |
4×lower | 3 | 3 | 3 | 3 | 3 | 3 | 3 | 3 | 4×Up | 1.68 |
30%Acr | 2 | 2.8 | 4 | 4.6 | 4.8 | 5.4 | 5.6 | 6 | 30%Acr | 1 |
100%TEMED | 10ul | 10ul | 10ul | 10ul | 10ul | 10ul | 10ul | 10ul | 100%TEMED | 5ul |
10%AP | 100ul | 100ul | 100ul | 100ul | 100ul | 100ul | 100ul | 100ul | 10%AP | 50ul |
附图一：SDS-PAGE 低分子量标准蛋白质考马斯亮蓝R-250染色结果
兔磷酸化酶B 97400道尔顿
牛血清白蛋白 66200道尔顿
兔肌动蛋白 43000道尔顿
牛碳酸酐 31000道尔顿
胰蛋白酶抑制剂 20100道尔顿
鸡蛋清溶菌 14400道尔顿