上海奥析科学仪器有限公司UV1901PC紫外分光光度计细胞色素C 活力测定法细胞色素C 活力测定法

试剂（1 )磷酸盐缓冲液（0 .2 m o l /L ) 取磷酸氢二钠

71. 6 4 g ,加水使溶解成1000ml，作为甲液。另取磷酸二氢

钠27. 6 0 g ,加水使溶解成1000ml，作为乙液，取甲液81ml

与乙液1 9 m l ,混匀，调节p H 值至7. 3。

( 2 )磷酸盐缓冲液（O .lm d /L ) 取磷酸盐缓冲液

(0. 2mol/L)500ml,加水稀释至 1000ml,调节 pH 值至 7. 3。

( 3 )磷酸盐缓冲液（0.02mol/L) 取磷酸盐缓冲液

(0. 2mol/L) 100ml, 加水稀释至 1000ml, 调节 pH 值至 7. 3。

(4 )琥珀酸盐溶液取琥珀酸与氢氧化钾各4. 72g, 加

水使溶解成1 0 0m l,调节p H 值至7. 3。

(5 )qinhuajia 溶液取qinhuajia 0. 65g，加水使溶解成100ml

后，用稀硫酸调节p H 值至7. 3。

(6 )去细胞色素C 的心悬浮液取新鲜猪(牛）心2 只，除

去脂肪与结缔组织，切成条，用绞肉机绞碎，置纱布兜中，

用水冲洗约2小时（经常搅动，挤出血色素），挤干，用水洗

数次，挤干，置磷酸盐缓冲液（0. Im o l/L )中浸泡约1 小时，

挤干，重复浸泡1次，用水洗数次，挤干，置组织捣碎机内，

加磷酸盐缓冲液(0.02md/L)适量恰使猪(牛）心浸没，捣成匀

浆，离心10分钟（普通离心机），取上层混悬液，加冰块少

量，迅速用稀醋酸调节p H 值至约5 . 5 ,立即离心1 5分钟，

166 .

取沉淀，加等体积的磷酸盐缓冲液（0. lm o l/L ) ，用玻璃匀浆

器磨匀后，贮存于冰箱中；临用时取1.0ml, 加磷酸盐缓冲

液(0. lmol/L )稀释至 10ml。

供试品溶液的制备取供试品，加水制成每lm l中含细

胞色素C 约3mg的溶液。

测定法取磷酸盐缓冲液（0.2mol/L)5ml、琥珀酸盐溶

液1.0ml与供试品溶液0 .5m l(如系还原型制剂，.应加人

O.Olmol/L铁qinhuajia 溶液0_ 0 5 m l) ,置25ml具塞比色管中，

加去细胞色素C 的心悬浮液0. 5m l与qinhuajia 溶液1. Oml, 加

水稀释至1 0 m l,摇匀，以同样的试剂作空白，照紫外-可见

分光光度法（通则0401)，在550nm的波长处附近，间隔

0.5mn找出zui大吸收波长，并测定吸光度，直至吸光度不再

增大为止，作为酶还原吸光度；然后各加连二亚硫酸钠约

5m g ,摇匀，放置约10分钟，在上述同一波长处测定吸光

度，直至吸光度不再增大为止，作为化学还原吸光度；按下

式计算：

细胞色素C 活力=

化学还原吸光度

X100%