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简单介绍细胞冻存的方法

时间:2018-05-02      阅读:507

    细胞是分裂后期的红细胞由幼年发展为成熟红细胞的一个阶段,此时红细胞的主核已排出,因胞质内含有核糖体,Giemsa染色呈灰蓝色,成熟红细胞的核糖体已消失,被染成淡橘红色。骨髓中嗜多染红细胞数量充足,由于无核,极易观察到微核,因此,骨髓中嗜多染红细胞成为微核试验的首*细胞群。
细胞实验原理
     染色单体或染色体的无着丝点断片,或因纺锤体受损而丢失的整个染色体,在细胞分裂后期,仍然在细胞质中。末期之后,单独形成一个或几个规则的次核,被包含在子细胞的胞质内,因比主核小,故称为微核。大小应为主核的1/20~1/5。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样。微核率是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关,所以可用简易的、快速、灵敏的微核计数来代替繁杂的畸变染色体计数。Matter 和Schmid建立的微核测试是一种比较理想的方法,目前国内外已把微核测试用于辐射损伤、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。
细胞冻存的方法:
1.细胞:选对数生长期细胞,收集细胞24小时前换液一次。 
2.计数:按常规方法把细胞制成细胞悬液,计数,令细胞密度达5×106/ml,离心去上清,吸入离心管中。 
3.冻存液:先用培养液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO冻存液,按上法一滴滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。 
4.分装:分装入无菌安剖中,每安剖加1.5毫升细胞悬液。 
5.封口:用塑料安剖时拧紧瓶口即可;如用火焰封闭安剖口后,仔细检查,定要封严,必要时可浸入蓝色液中观察,为安全起见,把安剖缝入纱布小袋中,以防液氮浸入后,融解时因受热发生爆炸伤人;纱袋一端系以线绳,末端扎有小牌,注明:细胞名称,冻存日期,以便日后查找。

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