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小鼠发动蛋白2,小鼠发动蛋白2ELISA试剂盒,小鼠elisa试剂盒操作步骤

时间:2012-10-16      阅读:402

小鼠发动蛋白2ELISA试剂盒,小鼠elisa试剂盒操作步骤:

 

1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

24μmol/g

5号标准品

150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

12μmol/g

4号标准品

150μl5号标准品加入150μl标准品稀释液

6μmol/g

3号标准品

150μl4号标准品加入150μl标准品稀释液

3μmol/g

2号标准品

150μl3号标准品加入150μl标准品稀释液

1.5μmol/g

1号标准品

150μl2号标准品加入150μl标准品稀释液

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 

7. 温育:操作同3

8. 洗涤:操作同5

9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

10. 终止:每孔加终止50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)

11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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